慢病毒載體介導(dǎo)hTERT基因修飾人腮腺多形性腺瘤細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：建立人腮腺多形性腺瘤有限細(xì)胞系，探討建立永生化人腮腺多形性腺瘤細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究。
　　 方法：取人腮腺多形性腺瘤患者原發(fā)腫瘤進(jìn)行原代培養(yǎng)，觀察細(xì)胞的形態(tài)特征，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，采用免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)特異性抗原標(biāo)志物(CK8、CK19、Calp、SMA、Vim)，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定；構(gòu)建pGC-FU-hTERT慢病毒載體，轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)的人腮腺多形性腺瘤細(xì)胞，通過(guò)繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、并通過(guò)Realtime PCR、Western

2、Blot的方法在mRNA和蛋白水平上檢測(cè)hTERT的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：人腮腺多形性腺瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)間約80d，傳代至16代，細(xì)胞呈短梭形、多角形，腫瘤性腺上皮細(xì)胞角蛋白弱陽(yáng)性，腫瘤性肌上皮細(xì)胞肌動(dòng)蛋白、鈣調(diào)蛋白、波形蛋白陽(yáng)性；轉(zhuǎn)染后人腮腺多形性腺瘤細(xì)胞hTERT mRNA表達(dá)量顯著上調(diào)，同時(shí)檢測(cè)到hTERT蛋白的表達(dá)，細(xì)胞增殖能力有一定程度的增強(qiáng)，生存周期有一定的延長(zhǎng)，細(xì)胞表型未發(fā)生轉(zhuǎn)化。
　　 結(jié)論：人腮腺多形