2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩87頁(yè)未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、組織工程的原理是利用工程字方法和手段,將具有特定功能或分化潛能的細(xì)胞(種子細(xì)胞)與可降解生物材料(支架材料)共植入體內(nèi),隨著種子細(xì)胞的不斷擴(kuò)增、細(xì)胞外基質(zhì)的分泌和生物材料的逐漸降解、吸收,最終形成具有正常結(jié)構(gòu)和功能的特定組織或器官。因此種子細(xì)胞和支架材料是組織工程研究的主要內(nèi)容。在組織工程的研究與應(yīng)用中,種子細(xì)胞的來(lái)源、分離純化、規(guī)模化擴(kuò)增等是制約其發(fā)展的重要瓶頸問(wèn)題之一。間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymalstemcells,MSCs

2、)是來(lái)源于發(fā)育早期中胚層的一類多能干細(xì)胞,在特定誘導(dǎo)條件下可分化為多種類型的結(jié)締組織,形成骨、軟骨、骨骼肌、肌腱和脂肪等多種組織,而且具有采集方便、易于體外培養(yǎng)、擴(kuò)增和誘導(dǎo)等特性,被認(rèn)為是一種理想的種子細(xì)胞。目前,骨髓來(lái)源的MSCs(bonemarrow-derivedMSCs,BMSCs)研究最多,但人BMSCs含量極低。近年來(lái),已有具有干/祖細(xì)胞特征的間充質(zhì)細(xì)胞自骨髓、外周血、脂肪及肌肉等組織中分離,這些組織的共同特征是來(lái)源于胚胎發(fā)

3、育期的中胚層。胎盤由滋養(yǎng)細(xì)胞及大量起源于胚外中胚層的間充質(zhì)和血管共同組成,提示胎盤中存在MSCs成分。對(duì)胎盤來(lái)源的MSCs(placenta-derivedMSCs,PMSCs)的研究也已展開。實(shí)驗(yàn)室前期的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明可以從胎盤組織分離培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞并且這些細(xì)胞具有與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞相似的細(xì)胞生物學(xué)特性。由于可以在體外預(yù)先建立胎盤MSCs庫(kù),實(shí)現(xiàn)即時(shí)使用,所以PMSCs在組織工程研究中具有廣闊的應(yīng)用前景。
   骨組織工程學(xué)要

4、求材料具有適宜的降解速率,使支架材料在一定時(shí)間內(nèi)吸收,形成具有功能活性的自身骨組織。骨替代材料降解過(guò)快不能提供新骨形成的支架,降解過(guò)慢則阻礙新骨的生長(zhǎng)及骨塑形,影響功能活性的自身骨組織形成。羥基磷灰石是骨組織主要的礦物質(zhì)成分,以其良好的生物相容性和生物活性引起研究人員的重視。然而羥基磷灰石材料降解速度非常緩慢,而且脆性大、柔韌性差。絲素具有生物相容性和生物可降解性,絲素特別是家蠶絲素是純天然,極易獲取且價(jià)格低廉的一種。以往研究表明絲素材

5、料可以支持入骨髓間充質(zhì)細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng)和體外增殖,促進(jìn)間充質(zhì)細(xì)胞分化成為成骨細(xì)胞、鈣鹽沉積以及骨性結(jié)構(gòu)、骨小梁的形成。然而絲素硬度低,在外力作用下極易變形的特性使得單純的絲素難以適應(yīng)移植環(huán)境。因此,構(gòu)造一種新型的絲素材料使其同時(shí)具有一定的硬度和韌性以及適當(dāng)?shù)牧W(xué)性能以適應(yīng)移植組織的結(jié)構(gòu)并運(yùn)用于骨組織工程成為必然。羥基磷灰石降解緩慢、脆性大,而絲素蛋白機(jī)械強(qiáng)度差。將兩者復(fù)合,絲素蛋白能改善羥基磷灰石的理化性能,并可調(diào)控SF/HA的降解速率,

6、SF/HA復(fù)合材料具有良好的組織相容性,有望成為一種新的骨修復(fù)替代材料。
   本研究從胎盤分離培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞(placentamesenchymalstemcells,PMSCs)并分析其免疫學(xué)特性,聯(lián)合絲素蛋白/羥基磷灰石材料(silkfibroin/hydroxyapatite,SF/HA)對(duì)兔橈骨的節(jié)段性骨缺損進(jìn)行修復(fù),以評(píng)價(jià)PMSCs和SF/HA材料在骨組織工程中應(yīng)用的可能性和價(jià)值。
   第一部分
 

7、  目的:探索間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymalstemcells,MSCs)在人胎盤組織中的分布規(guī)律以及體外分離培養(yǎng)的方法。
   方法:取正常剖宮產(chǎn)之足月健康產(chǎn)婦的新鮮胎盤組織,按中央帶(A)、中間帶(B)、邊緣帶(C)全層連續(xù)切片,以抗CD166、抗CD90、抗CD29分別作免疫熒光和免疫組化染色,顯微鏡下觀察陽(yáng)性細(xì)胞分布區(qū)域,采用HPIAS-1000彩色病理圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行圖象處理,同時(shí)應(yīng)用整體灌注的方法分離細(xì)胞,常

8、規(guī)的方法進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)并鑒定培養(yǎng)細(xì)胞的表面標(biāo)志及其分化潛能。
   結(jié)果:3個(gè)間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記分子CD166、CD90、CD29陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞,主要分布于血管內(nèi)皮下及血管附近間質(zhì)內(nèi)和胎盤中央帶,陽(yáng)性表達(dá)的強(qiáng)度在不同部位具有顯著性差異(P<0.05));整體灌注方法獲得的細(xì)胞培養(yǎng)后經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示,表達(dá)CD73、CD90、CD166和CD105,不表達(dá)CD34、CD45、CD14和CD106,呈現(xiàn)PMSCs表型;體外擴(kuò)增培養(yǎng)的PM

9、SCs成骨誘導(dǎo)后,由長(zhǎng)梭形向立方形轉(zhuǎn)變,VonKossa染色可見細(xì)胞呈集落生長(zhǎng)并出現(xiàn)鈣結(jié)節(jié);成脂肪誘導(dǎo)培養(yǎng)的PMSCs油紅O染色陽(yáng)性;成軟骨誘導(dǎo)2周后,PMSCs形態(tài)逐漸變得扁平,anti-collagentypeII免疫組織化學(xué)染色可見陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)Ⅱ型膠原;向神經(jīng)元樣細(xì)胞誘導(dǎo)ld后大多數(shù)PMSCs轉(zhuǎn)變?yōu)殡p極或多極神經(jīng)元細(xì)胞樣形態(tài),伸出突觸,染色可見NSE、GFAP陽(yáng)性;向內(nèi)皮樣細(xì)胞誘導(dǎo)7天以后,PMSCs逐步回縮,立體感增強(qiáng),KDR以

10、及v-WF染色結(jié)果不同程度陽(yáng)性。
   結(jié)論:胎盤各部位均存在表達(dá)CD166、CD90、CD29陽(yáng)性的間充質(zhì)干細(xì)胞,細(xì)胞的分布與血管有一定的相關(guān)性,整體灌注的方法可以分離細(xì)胞,臍帶附著處下方胎盤組織相對(duì)其他部位而言可能為MSCs富集區(qū)域,體外擴(kuò)增培養(yǎng)的PMSCs具有向成骨、軟骨、脂肪、神經(jīng)元樣和內(nèi)皮樣細(xì)胞分化的潛能。
   第二部分
   目的:探討PMSCs的免疫學(xué)特性及與絲素蛋白(silkfibroin,SF

11、)的相容性。
   方法:采用人以及兔雙向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MixedLymphocyteReactions,MLR)體系,根據(jù)不同比例加入絲裂霉素處理過(guò)的PMSCs,3H摻入法測(cè)定淋巴細(xì)胞增殖率并用ELISA法測(cè)定混合培養(yǎng)上清液中IL-2和IFN-y的含量;運(yùn)用SF溶液包被的培養(yǎng)瓶培養(yǎng)PMSCs,流式細(xì)胞術(shù)分析其表型并對(duì)其定向分化潛能進(jìn)行探討,進(jìn)一步觀察其對(duì)MLR體系中淋巴細(xì)胞增殖的影響;PMSCs置于SF膜材料培養(yǎng)后通過(guò)掃描

12、電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化。
   結(jié)果:PMSCs可以抑制人或兔混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)體系中淋巴細(xì)胞的增殖,抑制率與加入的PMSCs數(shù)量成正比,同時(shí)PMSCs可以減少混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中細(xì)胞因子IL-2、IFN-y的分泌;用SF溶液包被的培養(yǎng)瓶培養(yǎng)的PMSCs,其生長(zhǎng)特性、表面標(biāo)志、多向分化潛能無(wú)明顯變化;PMSCs在SF膜材料上生長(zhǎng)良好,培養(yǎng)8d時(shí)材料上細(xì)胞伸展增殖,分泌大量的的顆粒狀、網(wǎng)狀基質(zhì)物質(zhì),材料間隙被基質(zhì)填滿。
   結(jié)

13、論:PMSCs具有免疫調(diào)節(jié)作用;SF材料不影響PMSCs的生長(zhǎng)特性、表面標(biāo)志和多向分化潛能,具有良好的生物相容性。
   第三部分
   目的:探討PMSCs聯(lián)合絲素蛋白/羥基磷灰石材料(silkfibroin/hydroxyapatite,SF/HA)對(duì)兔橈骨的節(jié)段性骨缺損修復(fù)實(shí)驗(yàn),以評(píng)價(jià)PMSCs和SF/HA材料在骨組織工程中的應(yīng)用價(jià)值及其機(jī)制。
   方法:應(yīng)用BrDU標(biāo)記PMSCs并聯(lián)合SF/HA材料移植

14、下列兔橈骨缺損部位,24只新西蘭大白兔制成橈骨中段1.5cm長(zhǎng)的骨缺損模型,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(植入PMSCs/SF/HA)、對(duì)照組(植入SF/HA)、空白組(不植入修復(fù)材料)共3組。術(shù)后2、4、8、12周分別行大體觀察、組織學(xué)觀察和X線觀察,評(píng)分比較3組骨缺損修復(fù)的情況。
   結(jié)果:兔橈骨缺損植入修復(fù)術(shù)后2、4、8、12周,影像和組織形態(tài)學(xué)結(jié)果顯示,新骨生成在實(shí)驗(yàn)組均優(yōu)于對(duì)照組,空白組各時(shí)間點(diǎn)均無(wú)新骨形成。術(shù)后8周時(shí)實(shí)驗(yàn)組移植部

15、位免疫熒光染色仍可見BrDU陽(yáng)性細(xì)胞存在。術(shù)后8周和12周,評(píng)分比較實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組骨折愈合有顯著性差異(P<0.05)。
   結(jié)論:SF/HA材料與PMSCs聯(lián)合移植能夠修復(fù)兔橈骨缺損,可以作為組織工程骨的支架材料和種子細(xì)胞的來(lái)源。
   綜上所述,通過(guò)本研究發(fā)現(xiàn)胎盤各部位均存在表達(dá)CD166、CD90、CD29陽(yáng)性的間充質(zhì)干細(xì)胞,細(xì)胞的分布與血管有一定的相關(guān)性,整體灌注的方法可以分離細(xì)胞,體外擴(kuò)增培養(yǎng)的PMSCs具有

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論