2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的 大面積顱骨缺損的修復(fù)一直是神經(jīng)外科臨床工作的一個重點(diǎn),其關(guān)鍵問題是修復(fù)材料的來源,而傳統(tǒng)的修復(fù)材料存在各種各異的缺點(diǎn)。隨著組織工程的飛速發(fā)展,體外預(yù)構(gòu)的組織工程骨有可能為顱骨缺損提供較理想的修復(fù)方式。本試驗(yàn)探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)的生物學(xué)特性和成骨分化能力,研究以BMSCs為種子細(xì)胞、10%珊瑚羥基磷灰石(CHA)為細(xì)胞外基質(zhì)材料構(gòu)建的組織工程骨的成骨能力。 一、兔BMSCs的生物學(xué)特性和向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化的能

2、力 方法 以密度梯度離心法(1.073g/ml的淋巴細(xì)胞分離液)和貼壁篩選法獲得兔BMSCs,原代培養(yǎng)后1∶3傳代,分別接種于普通DMEM培養(yǎng)基(A組)和添加成骨誘導(dǎo)劑(含10-9mol/L地塞米松(DEX)、10mmol/Lβ-甘油磷酸鈉和50mg/LL-抗壞血酸(L-ASC))的DMEM培養(yǎng)基(B組)。定期更換培養(yǎng)基,每日在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀況和形態(tài)變化。用MTT法分析BMSCs在兩種培養(yǎng)條件下的生長活力。檢測兩種

3、培養(yǎng)條件下BMSCs向成骨細(xì)胞分化的指標(biāo),包括定量法檢測第1、2、3、4周時堿性磷酸酶(ALP)的表達(dá),免疫組化法檢測第4周時BMSCs分泌Ⅰ型膠原和四環(huán)素?zé)晒夥z測第5周時礦化結(jié)節(jié)的形成。 結(jié)果 密度梯度離心法和貼壁篩選法從骨髓中獲得可貼壁增值、呈紡錘形的BMSCs。在普通培養(yǎng)(A組)和成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)(B組)條件下BMSCs從第3天開始快速增值,第8天達(dá)到最高峰;在3-8天細(xì)胞數(shù)兩組間有顯著差異性。ALP定量檢測示A、B兩組B

4、MSCs在4周時表達(dá)量明顯升高,有顯著差異性。4周時Ⅰ型膠原免疫組化B組陽性率90%,A組無陽性細(xì)胞。5周時礦化結(jié)節(jié)四環(huán)素染色于熒光顯微鏡下可見B組礦化結(jié)節(jié)呈黃綠色,A組無礦化結(jié)節(jié)。 結(jié)論 骨髓是良好的間充質(zhì)干細(xì)胞來源,通過密度梯度離心法結(jié)合貼壁法能從兔骨髓中提取到BMSCs,經(jīng)過培養(yǎng)傳代后可獲得足量的細(xì)胞。10-9mol/LDEX、10mmol/Lβ-甘油磷酸鈉和50mg/LL-ASC聯(lián)合誘導(dǎo)下,能夠明顯促進(jìn)BMSCs向成骨

5、方向的分化,表現(xiàn)為ALP的表達(dá)、Ⅰ型膠原的分泌和礦化結(jié)節(jié)形成,是促使BMSCs向成骨方向分化的良好的誘導(dǎo)劑。通過誘導(dǎo)BMSCs成骨分化并結(jié)合細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察,可以初步鑒定所獲得的成纖維樣細(xì)胞符合BMSCs的特點(diǎn)。 二、兔BMSCs復(fù)合10%珊瑚羥基磷灰石修復(fù)顱骨缺損 方法 原代培養(yǎng)的兔BMSCs以1∶3傳代,接種于添加成骨誘導(dǎo)劑(10-9mol/LDEX、10mmol/Lβ-甘油磷酸鈉和50mg/LL-ASC)的DMEM

6、培養(yǎng)基。定期更換培養(yǎng)基,每日在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀況和形態(tài)變化。收集第4代經(jīng)成骨誘導(dǎo)的細(xì)胞,以5×10-7/ml的密度接種于10%CHA,培養(yǎng)1,3和7天后作掃描電鏡檢查。以培養(yǎng)7天的10%CHA+BMSCs復(fù)合物植入兔顱骨直徑1.5cm缺損處為試驗(yàn)組(A組,n=8);單純植入CHA(B組,n=4)和無任何植入物(C組,n=4)為對照組。A組于6和12周、B和C組于12周時行X線檢查;行X線后分別處死動物,觀察修復(fù)后顱骨表面的完整

7、性、硬度、與周圍自體骨質(zhì)的結(jié)合情況等;然后取材固定、脫鈣、包埋、切片,行HE染色。 結(jié)果 BMSCs向成骨誘導(dǎo)分化后,與10%CHA復(fù)合培養(yǎng)3-7天,掃描電鏡顯示細(xì)胞能在10%CHA很好地黏附生長。大體觀察可見A組6、12周時組新生骨質(zhì)地硬,與周圍自體骨結(jié)合緊密;B組12周時表面粗糙,呈顆粒狀,質(zhì)地軟,周圍包繞組織囊;C組僅有軟組織填充。X線檢查可見A組植入物與自體骨密度基本一致,兩者結(jié)合緊密;B組密度明顯降低,呈顆粒狀密度影

8、,和自體骨結(jié)合不緊密;C組僅可見軟組織密度影。HE染色示A組有大量新骨形成,新生骨之間相互結(jié)合,有血管長入,未見炎細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤。B組可見材料明顯降解,無新生骨。C組僅可見結(jié)締組織。 結(jié)論 10%CHA有良好的生物相容性、良好的細(xì)胞材料表面、適當(dāng)?shù)纳锝到庑院腿S立體結(jié)構(gòu),是骨組織工程良好的細(xì)胞外基質(zhì)材料。BMSCs是骨組織工程理想的種子細(xì)胞,可在10%CHA表面緊密黏附生長。以BMSCs為種子細(xì)胞,10%CHA為支架材料

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