納米羥基磷灰石-細(xì)菌纖維素復(fù)合支架對(duì)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞粘附、增殖及分化影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察納米羥基磷灰石/細(xì)菌纖維素復(fù)合支架(Nano-hydroxyapatite/bacterial cellulose，nHA/BC)對(duì)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesechymalstem cells，BMSCs)的粘附、增殖及分化的影響，以探討其在骨組織工程領(lǐng)域潛在的應(yīng)用價(jià)值。
　　方法：采用密度梯度離心和貼壁篩選相結(jié)合的方法培養(yǎng)兔BMSCs，通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)和流式細(xì)胞術(shù)鑒定BMSCs。將BMSCs與nH

2、A/BC體外復(fù)合，倒置相差顯微鏡及掃描電鏡觀察BMSCs與nHA/BC的復(fù)合情況。CCK-8法檢測并比較有nHA/BC組、無nHA/BC組的細(xì)胞增殖活性。利用含地塞米松、β-甘油磷酸鈉及維生素C的誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)細(xì)胞向成骨分化，觀察細(xì)胞分化過程中的形態(tài)變化，檢測茜素紅染色、堿性磷酸酶染色觀察成骨分化情況，掃描電鏡觀察礦化基質(zhì)沉積，RT-PCR法檢測Ⅰ型膠原、骨鈣素、骨橋蛋白mRNA的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：BMSCs約24h貼壁，并由

3、圓形逐步變化為長梭形、多角形和不規(guī)則形等，至第3代呈均勻一致的長梭形。第3代細(xì)胞流式細(xì)胞儀檢測其表面標(biāo)記CD44、CD90、CD105陽性，CD45陰性。倒置相差顯微鏡下觀察BMSCs能夠在nHA/BC表面有效的粘附生長，保持細(xì)胞形態(tài)，至7d時(shí)細(xì)胞融合成片。掃描電鏡觀察：nHA/BC呈三維立體多孔結(jié)構(gòu)，BMSCs與nHA/BC復(fù)合后，BMSCs伸出偽足粘附在表面及孔隙內(nèi)，細(xì)胞相互連接、融合。CCK-8法檢測結(jié)果顯示有nHA/BC組與無n

4、HA/BC組的細(xì)胞增殖活性比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。細(xì)胞誘導(dǎo)后呈現(xiàn)明顯的成骨細(xì)胞特征，可見鈣結(jié)節(jié)生成。茜素紅、堿性磷酸酶染色誘導(dǎo)組呈陽性反應(yīng)，非誘導(dǎo)組呈陰性反應(yīng)。掃描電鏡觀察可見nHA/BC膜上明顯的礦物質(zhì)沉積，并與nHA/BC膜緊密相連，結(jié)節(jié)中可見大量粗大的顆粒。RT-PCR結(jié)果中可以看出，nHA/BC膜上的BMSCs成骨誘導(dǎo)后可以觀察到Ⅰ型膠原、骨鈣素和骨橋蛋白等成骨標(biāo)志基因的明顯地表達(dá)。
　　結(jié)論：1.密度梯