白色念珠菌磷脂酶與其毒力因子、耐藥性及基因多態(tài)性的關(guān)系研究.pdf

1、背景與目的：白色念珠菌的毒力因子主要包括：細胞表面粘附結(jié)構(gòu)、利于侵入的酶(天冬氨酸蛋白酶、磷脂酶)、表型轉(zhuǎn)換等。宿主細胞膜中的主要成分磷脂，可被白色念珠菌分泌的磷脂酶所分解，白色念珠菌通過完整性受損的細胞膜侵入宿主細胞。目前，還不清楚磷脂酶和白色念珠菌其他毒力因子之間存在怎樣的關(guān)系，因此，本實驗檢測臨床分離的白色念珠菌磷脂酶活性，將其分為磷脂酶高活性組和磷脂酶低活性組，探討磷脂酶與菌株其他毒力因子(溶血活性、細胞表面疏水性、粘附頰粘膜上

2、皮細胞)、耐藥性及基因多態(tài)性之間的關(guān)系，從而對深入了解磷脂酶在白色念珠菌致病性和耐藥性中的作用提供實驗依據(jù)，為抗真菌藥物的研制及白色念珠菌的診斷和治療奠定理論基礎(chǔ)。
　　 方法：采用蛋黃平板法對80株白色念珠菌的磷脂酶活性進行檢測，以PZ值表示磷脂酶活性，根據(jù)菌株P(guān)Z值，選出磷脂酶活性較高和磷脂酶活性較低的菌株各10株，分為兩組。比較兩組的溶血活性、細胞表面疏水性、粘附頰粘膜上皮細胞能力的差異，分析白色念珠菌磷脂酶與上述三種毒力

3、因子之間的關(guān)聯(lián)性；同時進行藥物敏感性檢測，比較兩組間耐藥性的差異；提取菌株DNA，應(yīng)用隨機擴增多態(tài)性DNA(RAPD)技術(shù)分析兩組的基因型特征。
　　 結(jié)果：從臨床分離的80株白色念珠菌中，78株可以分泌磷脂酶，磷脂酶陽性檢出率為97.5％，其PZ值的范圍為0.566～1.000，A組PZ均值為0.639±0.043，B組PZ均值為0.847±0.079，兩組有顯著性差異(p＜0.05)。兩組的溶血活性、細胞表面疏水性均無顯著性

4、差異(p＞0.05)，菌株磷脂酶活性與溶血活性、細胞表面疏水性均無直接關(guān)聯(lián)(r=0.122，p＞0.05)、(r=0.072，p＞0.05)。而兩組的粘附力有顯著性差異(p＜0.05)，A組菌株對頰粘膜上皮細胞的粘附力顯著強于B組，磷脂酶活性與粘附力呈正相關(guān)(r=0.773，p＜0.01)。兩組菌株對7種抗真菌約物的耐藥性明顯不同，A組中對益康唑耐藥率為70％，對咪康唑、氟康唑、伊曲康唑也有中敏或者耐藥情況；而B組中對益康唑耐藥率僅為1

5、0％，對其余的6種藥物均敏感。RAPD結(jié)果顯示，除B組中兩株磷脂酶陰性的菌株顯示為獨特的基因型外，剩余A、B兩組菌株主要條帶的數(shù)量和位置差異較小，在1300 bp處均顯示一高亮度條帶，在＞1500 bp處各顯示有3條亮帶,遺傳相似系數(shù)在0.500～1.000之間，兩組菌株基因多態(tài)性無明顯差異。
　　 結(jié)論：臨床分離的白色念珠菌多數(shù)可以產(chǎn)生磷脂酶，說明磷脂酶是白色念珠菌重要的毒力因子；其活性與菌株的粘附力有一定的相關(guān)性，但與菌株的