浙東白鵝就巢性的分子遺傳機(jī)理研究.pdf

1、浙東白鵝是我國優(yōu)良的地方家鵝品種之一,具有早期生長快、肉質(zhì)鮮嫩、性成熟早和抗病力強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn),在近幾年畜牧業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整中脫穎而出,得到快速發(fā)展。但是,浙東白鵝具有很強(qiáng)的就巢性而直接影響到母鵝產(chǎn)蛋量,致使其繁殖力低,無法適應(yīng)大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。因此開展浙東白鵝就巢性的分子遺傳機(jī)理研究,了解影響其就巢行為的遺傳因素,通過推動(dòng)分子遺傳標(biāo)記輔助選擇進(jìn)行品種選育。催乳素是垂體前葉催乳素細(xì)胞分泌的多肽類激素,具有促進(jìn)家禽繁殖、生長發(fā)育、滲透調(diào)節(jié)、新陳代謝和

2、免疫等功能,在禽類,催乳素主要誘導(dǎo)和維持母禽的就巢性能。本研究以影響家禽就巢性的主要基因—催乳素基因(PRL)、催乳素受體基因(PRLR)及影響催乳素表達(dá)的垂體特異性轉(zhuǎn)錄因子1(Pit-1)為候選基因來研究浙東白鵝就巢性的分子遺傳機(jī)理,首先通過PCR技術(shù)獲得三個(gè)候選基因的DNA序列,然后通過熒光定量PCR技術(shù)SYBR GreenⅠ方法,研究了催乳素和催乳素受體基因在浙東白鵝的產(chǎn)蛋期、就巢期和恢復(fù)期三個(gè)生理時(shí)期,下丘腦、垂體和卵巢組織中的

3、表達(dá)特點(diǎn),最后通過PCR-SSCP技術(shù)研究了催乳素、催乳素受體和垂體特異性生長因子在浙東白鵝群體中的SNPs,應(yīng)用統(tǒng)計(jì)分析軟件SPSS13.0分析了SNPs標(biāo)記與浙東白鵝生長繁殖性狀的相關(guān)性,得到了以下主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　 1.通過PCR擴(kuò)增獲得了浙東白鵝催乳素(PRL)基因的全序列,長度為5917bp,它含有5個(gè)外顯子,分別為27 bp、181 bp、107 bp、179 bp、191 bp。Genebank登錄號(hào)為DQ660

4、983。獲得了浙東白鵝催乳素受體(PRLR)基因的部分序列,長度為1305 bp,為其主要外顯子序列,Genebank登錄號(hào)為DQ660982。獲得了浙東白鵝垂體特異性轉(zhuǎn)錄因子1(Pit-1)基因的5個(gè)含外顯子的DNA序列,長度分別為963 bp、803 bp、253 bp、169 bp、210 bp,Genebank登錄號(hào)為EF522106(963 bp and803 bp)、EF457938(253 bp and169 bp)、EF

5、413635(210bp)。獲得了浙東白鵝的看家基因3—磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)的部分DNA序列為235 bp,在Genebank登錄號(hào)為DQ454070。同時(shí),擴(kuò)增得到GAPDH的mRNA序列為209 bp,在GeneBank登錄號(hào)為DQ821717。
　　 2.用熒光定量PCR技術(shù)SYBR GreenⅠ方法研究發(fā)現(xiàn)浙東白鵝PRL和PRLR基因在產(chǎn)蛋期、就巢期和恢復(fù)期的表達(dá)量具有顯著差異(P＜0.05),其中就巢期和恢復(fù)

6、期的表達(dá)量差異極顯著(P＜0.01)。就巢期鵝的PRL基因和PRLR基因表達(dá)量最高,其次為產(chǎn)蛋期鵝,恢復(fù)期鵝PRL基因表達(dá)量最小。
　　 對(duì)不同組織PRL的表達(dá)量分析,發(fā)現(xiàn)在垂體與下丘腦、卵巢中的表達(dá)量有極顯著的差異(P＜0.01),卵巢與下丘腦的表達(dá)量差異顯著(P＜0.05)。PRL表達(dá)量垂體＞下丘腦＞卵巢。
　　 對(duì)不同組織PRLR的表達(dá)量分析,發(fā)現(xiàn)在垂體與卵巢中的表達(dá)量、卵巢與下丘腦的表達(dá)量均有極顯著的差異(P＜0

7、.01),在垂體與下丘腦中的表達(dá)量差異不顯著(P＞0.05)。PRLR表達(dá)量垂體＞下丘腦＞卵巢。
　　 浙東白鵝PRL和PRLR的表達(dá)具有極顯著的相關(guān)性(P＜0.01),其表達(dá)量的相關(guān)系數(shù)是0.698。
　　 3.應(yīng)用PCR-SSCP技術(shù)對(duì)浙東白鵝PRL,基因SNPs多態(tài)位點(diǎn)的檢測表明,PRL基因在檢測的DNA長度范圍內(nèi)有14個(gè)單堿基突變位點(diǎn),均是無義突變。其中突變?cè)?79 bp(C-A)、502 bp(A-C)、511

8、 bp(G-C)、515 bp(A-G)、520bp(C-A)、575 bp(T-G)3985 bp(G-A)、5070 bp(T-C)、5170 bp(G-C)、5343bp(T-C)、5344 bp(G-A)5478 bp(T-G)、5612 bp(G-T)分布在內(nèi)含子區(qū)域,不會(huì)導(dǎo)致編碼氨基酸的變化;5856 bp(A-C)突變?cè)谕怙@子5中,都編碼絲氨酸,是無義突變,沒有導(dǎo)致編碼氨基酸的改變。
　　 應(yīng)用特異性引物法對(duì)浙東白

9、鵝PRLR基因SNPs多態(tài)位點(diǎn)的檢測表明,PRLR基因的2個(gè)突變位點(diǎn)均處于外顯子中,其中694 bp(A-C)編碼氨基酸都是組氨酸(His),是無義突變;981 bp(A-G)編碼氨基酸從天門冬氨酸(Asp)變?yōu)楦拾彼?Gly),是有義突變。對(duì)就巢性不同的鵝種的PRL尺基因SNPs的檢測結(jié)果表明其與就巢性有一定的關(guān)系。結(jié)合PRL基因SNPs的PIC和hardy-weinberg平衡的情況,得出PRL和PRLR基因是影響浙東白鵝就巢性的主