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文檔簡介
1、目的:高氧所致的肺損傷是發(fā)生支氣管肺發(fā)育不良的主要因素之一。最近的研究發(fā)現(xiàn),Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ期支氣管肺發(fā)育不良患兒的支氣管和肺泡上皮細胞凋亡率增加。動物實驗也證實高濃度高氧暴露的新生肺組織細胞凋亡率增加,但分子機制不清。中濃度氧高氧暴露與細胞凋亡的關系未有報道。本實驗室前期實驗證實95%O2暴露導致p53和p21WAF/CIP1基因表達一過性增加,其中p53誘導p21WAF/CIP1表達增加,后者導致細胞周期停滯,同時p53也促進細胞凋亡。另
2、有動物試驗發(fā)現(xiàn)在高氧暴露時Bcl-2家族發(fā)生改變。已知在細胞凋亡的內源性通路中,定位于線粒體外膜的Bax通過寡聚化形成孔道,促進細胞色素c等促凋亡分子釋放。而Bcl-XL則可抑制Bax的活化。本研究建立中濃度高氧暴露(60%O2)的新生大鼠支氣管肺發(fā)育不良模型,并探討細胞凋亡相關基因Bax和Bcl-XL表達改變及與氧暴露的時相關系。 方法:新生足月Spraque-Dawley大鼠隨機分為實驗組和對照組,每組8只,制備60%O2致
3、新生鼠支氣管肺發(fā)育不良模型。蘇木素-伊紅染色觀察生后1d、4d、7d、11d、14d肺組織病理改變,應用HMIAS-2000高清晰度彩色醫(yī)學圖文報告分析系統(tǒng)計算平均肺泡面積和單位面積肺泡數(shù)。免疫組織化學染色技術檢測Bax及Bcl-XL基因蛋白的表達,以平均吸光度評估肺組織蛋白表達強度。逆轉錄—聚合酶鏈式反應技術檢測Bax和Bcl-XL基因mRNA表達,聚合酶鏈式反應產物經(jīng)2.5%瓊脂糖凝膠電泳后,利用凝膠成像分析系統(tǒng)計算目的基因條帶/內
4、參照基因條帶平均吸光度比值作為目的基因相對mRNA表達水平。所有結果以均值±標準差表示。采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件包分析,各組之間比較采用單因素方差分析,兩兩之間比較用q檢驗。結果P<0.05為顯著性檢驗標準。 結果:生后1d~14d的空氣組新生大鼠肺泡結構逐漸發(fā)育成熟,平均肺泡面積變小,單位面積肺泡數(shù)增多。與空氣組比較,高氧組自4d開始出現(xiàn)肺泡發(fā)育障礙,單位面積肺泡數(shù)減少,平均肺泡面積增大。病變至14d最為明顯,肺泡結構簡單
5、化,肺組織炎性細胞浸潤?;虮磉_方面,高氧組與空氣組比較,Bax基因表達于生后1d開始增加,其mRNA水平于生后11d開始降低(q=8.4802,P<0.05),蛋白表達于生后14d降低(q=6.8364,P<0.05);Bcl-XL基因mRNA水平于生后1d至14d表達增加,其蛋白表達在第1d較低(q=10.4299,P<0.05),隨后增加。差異有顯著意義。Bax和Bcl-XL蛋白主要分布在肺支氣管上皮細胞。隨著氧暴露時間延長,高氧
6、組Bax的mRNA及蛋白和Bcl-XL的mRNA水平均呈降低趨勢,而Bcl-XL蛋白表達呈上升趨勢??諝饨M的BaxmRNA水平從11d開始增加,蛋白水平從14d開始增加??諝饨MBcl-XLmRNA和蛋白水平均在第1d表達最豐。 結論:中濃度高氧暴露模型與支氣管肺發(fā)育不良患兒的肺部病理改變相似,細胞凋亡可能參與了高氧誘導的肺損傷。高氧暴露誘導新生大鼠肺細胞凋亡的調節(jié)可能和Bax/Bcl-XL基因表達異常有關。在高氧暴露早期,促凋亡
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