60％O-,2-暴露對(duì)新生大鼠肺Bcl-2類基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的:高氧所致的肺損傷是發(fā)生支氣管肺發(fā)育不良的主要因素之一。最近的研究發(fā)現(xiàn)，Ⅱ，Ⅲ和Ⅳ期支氣管肺發(fā)育不良患兒的支氣管和肺泡上皮細(xì)胞凋亡率增加。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也證實(shí)高濃度高氧暴露的新生肺組織細(xì)胞凋亡率增加，但分子機(jī)制不清。中濃度氧高氧暴露與細(xì)胞凋亡的關(guān)系未有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)室前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)95％O2暴露導(dǎo)致p53和p21WAF/CIP1基因表達(dá)一過性增加，其中p53誘導(dǎo)p21WAF/CIP1表達(dá)增加，后者導(dǎo)致細(xì)胞周期停滯，同時(shí)p53也促進(jìn)細(xì)胞凋亡。另

2、有動(dòng)物試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在高氧暴露時(shí)Bcl-2家族發(fā)生改變。已知在細(xì)胞凋亡的內(nèi)源性通路中，定位于線粒體外膜的Bax通過寡聚化形成孔道，促進(jìn)細(xì)胞色素c等促凋亡分子釋放。而Bcl-XL則可抑制Bax的活化。本研究建立中濃度高氧暴露(60％O2)的新生大鼠支氣管肺發(fā)育不良模型，并探討細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Bax和Bcl-XL表達(dá)改變及與氧暴露的時(shí)相關(guān)系。 方法:新生足月Spraque-Dawley大鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組8只，制備60％O2致

3、新生鼠支氣管肺發(fā)育不良模型。蘇木素-伊紅染色觀察生后1d、4d、7d、11d、14d肺組織病理改變，應(yīng)用HMIAS-2000高清晰度彩色醫(yī)學(xué)圖文報(bào)告分析系統(tǒng)計(jì)算平均肺泡面積和單位面積肺泡數(shù)。免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測(cè)Bax及Bcl-XL基因蛋白的表達(dá)，以平均吸光度評(píng)估肺組織蛋白表達(dá)強(qiáng)度。逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)檢測(cè)Bax和Bcl-XL基因mRNA表達(dá)，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物經(jīng)2.5％瓊脂糖凝膠電泳后，利用凝膠成像分析系統(tǒng)計(jì)算目的基因條帶/內(nèi)

4、參照基因條帶平均吸光度比值作為目的基因相對(duì)mRNA表達(dá)水平。所有結(jié)果以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件包分析，各組之間比較采用單因素方差分析，兩兩之間比較用q檢驗(yàn)。結(jié)果P＜0.05為顯著性檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果:生后1d～14d的空氣組新生大鼠肺泡結(jié)構(gòu)逐漸發(fā)育成熟，平均肺泡面積變小，單位面積肺泡數(shù)增多。與空氣組比較，高氧組自4d開始出現(xiàn)肺泡發(fā)育障礙，單位面積肺泡數(shù)減少，平均肺泡面積增大。病變至14d最為明顯，肺泡結(jié)構(gòu)簡單

5、化，肺組織炎性細(xì)胞浸潤?；虮磉_(dá)方面，高氧組與空氣組比較，Bax基因表達(dá)于生后1d開始增加，其mRNA水平于生后11d開始降低(q=8.4802，P＜0.05)，蛋白表達(dá)于生后14d降低(q=6.8364，P＜0.05)；Bcl-XL基因mRNA水平于生后1d至14d表達(dá)增加，其蛋白表達(dá)在第1d較低(q=10.4299，P＜0.05)，隨后增加。差異有顯著意義。Bax和Bcl-XL蛋白主要分布在肺支氣管上皮細(xì)胞。隨著氧暴露時(shí)間延長，高氧

6、組Bax的mRNA及蛋白和Bcl-XL的mRNA水平均呈降低趨勢(shì)，而Bcl-XL蛋白表達(dá)呈上升趨勢(shì)。空氣組的BaxmRNA水平從11d開始增加，蛋白水平從14d開始增加。空氣組Bcl-XLmRNA和蛋白水平均在第1d表達(dá)最豐。 結(jié)論:中濃度高氧暴露模型與支氣管肺發(fā)育不良患兒的肺部病理改變相似，細(xì)胞凋亡可能參與了高氧誘導(dǎo)的肺損傷。高氧暴露誘導(dǎo)新生大鼠肺細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)可能和Bax/Bcl-XL基因表達(dá)異常有關(guān)。在高氧暴露早期，促凋亡