2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  運用基因芯片技術分析動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)大鼠與正常大鼠動脈組織中的差異性表達基因,篩選其中與細胞外基質(Extracellular matrix,ECM)代謝相關的基因,探討ECM與AS發(fā)病的關系。
  觀察ECM代謝相關基因中組織蛋白酶D(cathepsin D,CathD)在AS大鼠動脈組織中的分布及表達水平,研究其在AS發(fā)病中的作用。
  方法:
 ?。?)以高脂

2、飼料(3%膽固醇、0.5%膽酸鈉、5%精制糖、10%豬油及81.5%基礎飼料)喂養(yǎng)加維生素D3腹腔注射法建立SD大鼠AS模型;
 ?。?)實驗第14周末,檢測大鼠血清總膽固醇(total cholesterol,TC)及甘油三酯(triglyeride,TG),進行主動脈、冠狀動脈HE及油紅O染色;
 ?。?)提取主動脈組織RNA,應用基因芯片技術分析差異性表達基因,根據基因芯片結果篩選與ECM代謝相關的基因CathD,以免

3、疫熒光及免疫印跡法檢測CathD在動脈組織中的分布情況及表達水平。
  結果:
 ?。?)以高脂飲食加腹腔注射維生素D3的方法成功建立了大鼠AS模型。14周時模型組TG和TC均較對照組明顯升高(P<0.01);HE染色可見模型組大鼠主動脈內皮細胞排列紊亂,部分脫落,中膜平滑肌細胞、纖維組織增生伴點狀或片狀鈣化,彈性纖維層結構不清,形成纖維增生性動脈粥樣硬化病變。模型組主動脈、冠狀動脈油紅O染色可見內皮下橙紅色脂質沉積。對照組

4、動脈組織未見明顯異常。
 ?。?)采用覆蓋20500個大鼠基因的Oligo基因芯片,結果顯示有1728個基因發(fā)生差異性表達,其中1218條基因表達下調,510基因表達上調,這些差異性表達基因分別與炎癥、脂代謝、氧化應激、細胞凋亡等相關。其中可能與ECM代謝相關的基因有162條,表達上調的包括:血小板反應素、骨橋蛋白、基底膜蛋白多糖、MMp-11,CathB、L、D、Y細胞因子及炎癥因子(TNF-α)等;表達下調的包括:生長因子(T

5、GF-β),CystatinC,MMp-2、16、23,絲氨酸蛋白酶抑制劑等。
 ?。?)免疫熒光檢測發(fā)現AS組大鼠動脈組織中紅色熒光標記的CathD表達增加,主要分布在動脈內膜、中膜,在增厚的中膜中表達增高更明顯。在對照組表達較少或不表達,主要分布于內膜及中膜。Western-blot檢測提示:與對照組比較,AS組大鼠動脈組織CathD蛋白增加(P<0.05)。
  結論:
  (1)通過高脂飼料加維生素D3腹腔注射

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