超聲輻照微泡在腎腫瘤診斷及rAAV轉(zhuǎn)染中的研究.pdf

1、目的：⑴探討超聲造影(CEUS)檢查技術(shù)對腎皮質(zhì)實(shí)性腫瘤及腎盂腫瘤的有效診斷指標(biāo)及診斷效率。⑵重組腺相關(guān)病毒(rAAV)載體在腎細(xì)胞癌(RCC)基因治療領(lǐng)域具有前景，但轉(zhuǎn)染率低下限制其應(yīng)用。本研究探索超聲靶向破壞微泡(UTMD)技術(shù)能否提高rAAV在腎癌細(xì)胞(786-0)的轉(zhuǎn)染率，為rAAV應(yīng)用于RCC基因轉(zhuǎn)染研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：①對121例<5cm的實(shí)性腎皮質(zhì)腫瘤及28例腎盂占位進(jìn)行CEUS檢查。應(yīng)用Sequoia512

2、超聲儀，探頭4C1-S，對比脈沖序列(CPS)造影模式，機(jī)械指數(shù)0.21，聲諾維(SonoVue)劑量0.8～1.2ml。CEUS前進(jìn)行常規(guī)超聲檢查，聲像圖上分析病變回聲、大小及血流形態(tài)。②不同條件UTMD預(yù)輻照rAAV2，與未預(yù)輻照組比較，確定UTMD是否會損傷rAAV2感染活性；不同條件UTMD輻照786-0細(xì)胞，輻照結(jié)束即刻測定細(xì)胞生存率，觀察UTMD參數(shù)對細(xì)胞生存率的影響；聯(lián)合UTMD及rAAV2感染786-0細(xì)胞，研究不同聲強(qiáng)

3、，輻照時(shí)間，微泡體積，病毒MOI對轉(zhuǎn)染率的影響，觀察延遲效果，探索相應(yīng)機(jī)制。 結(jié)果：⑴在CEUS圖像上利用消退相高增強(qiáng)和不均勻增強(qiáng)的有效指標(biāo)診斷≤5cm腎細(xì)胞癌(RCCs)的特異性及敏感性分別為91.3％和84.8％、57.5％和60.3％，前者有助于提示富血供的透明細(xì)胞RCCs亞型，CEUS較CECT及MRI更敏感反映這類腫瘤的微循環(huán)灌注；CEUS能明確診斷腎柱肥大。CEUS對腎盂腫瘤的檢出特異性達(dá)100％，敏感性87％，較常

4、規(guī)超聲(80％，65.2％)明顯提高；密集增強(qiáng)的腎盂腫瘤易于檢出，浸潤狀增強(qiáng)的病變提示浸潤性腎盂癌。⑵1×104～1×106MOI的rAAV2在786-0細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率為17.28±2.44％。當(dāng)UTMD的聲強(qiáng)≤2W/cm2，時(shí)間≤120s，微泡體積≤60μl，頻率1MHz，占空比(DC)50％，脈沖重復(fù)頻率(PRF)100Hz時(shí)，UTMD輻照不會損傷rAAV2感染活性。 結(jié)論：①CEUS有助于富血供透明細(xì)胞RCCs及腎柱肥大的定