控制采后炭疽病高效拮抗菌的選育及作用機(jī)理研究.pdf

1、枯草芽孢桿菌能產(chǎn)生大量抗菌物質(zhì)，是具有較好拮抗作用的菌株，本實(shí)驗(yàn)采用離子注入枯草芽孢桿菌獲得誘變菌株，以蘋果采后炭疽病菌為指示菌進(jìn)行了篩選，并將誘變菌株用于蘋果采后炭疽病的防治效果，還探討了其遺傳穩(wěn)定性、營(yíng)養(yǎng)要求和發(fā)酵條件、抗菌機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1.離子注入枯草芽孢桿菌高效拮抗菌的誘變與篩選 利用低能氮離子對(duì)枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)進(jìn)行注入誘變，獲得誘變菌株。通過(guò)平板初篩，篩選出6株對(duì)蘋果炭

2、疽病菌有較高抑菌作用的菌株，經(jīng)蘋果果實(shí)活體測(cè)定從中篩選對(duì)蘋果炭疽病有較好作用的菌株。接種方式試驗(yàn)，表明方式二的效果好于方式一，對(duì)蘋果炭疽病表現(xiàn)出較好的保護(hù)作用。其中室溫下的防治效果較好菌株為BS80-6，14d時(shí)的防效為33.28％；低溫條件下BS100-1、BS100-6、BS80-6、BS120-8的效果較好，30d時(shí)的防效分別為98.36％、95.36％、95.52％、93.52％；變溫下各菌株BS80-1、BS100-1、BS1

3、20-8的效果最好，30d時(shí)的防效分別為84.59％、75.15％、72.40％。誘變菌株對(duì)分生孢子盤抑制作用最好的菌株分別為較BS-CK好的菌株有：BS80-6、BS100-6(室溫)；BS100-1、BS100-6、BS120-8、BS80-6(低溫)，變溫時(shí)各菌株對(duì)病菌分生孢子盤的作用低于BS-CK。各誘變菌株對(duì)潛伏侵染控制效果中，經(jīng)各誘變菌株處理的蘋果室溫下放置20d后，BS80-6、BS120-8、BS80-1對(duì)潛伏侵染表現(xiàn)了

4、一定的控病作用。借抗菌三種處理液的抑菌和防病作用中發(fā)酵液的作用最強(qiáng)。 2.枯草芽孢桿菌誘變菌株遺傳穩(wěn)定性的測(cè)定 具有遺傳穩(wěn)定性是誘變菌株應(yīng)用價(jià)值的前提，本實(shí)驗(yàn)將誘變菌株轉(zhuǎn)接7代，用其測(cè)定其對(duì)炭疽病的防治效果，結(jié)果表明該菌株在防病效果上具有遺傳穩(wěn)定性。 3.枯草芽孢桿菌誘變菌株的生長(zhǎng)和發(fā)酵條件研究 BS80-6(B．subilis-80-6)是經(jīng)離子注入枯草芽孢桿菌誘變獲得的對(duì)蘋果炭疽病具有高效拮抗作用的菌

5、株，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)對(duì)其生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)進(jìn)行研究的結(jié)果表明：BS80-6生長(zhǎng)最佳的碳源為麥芽糖，最佳氮源是蛋白胨，最佳礦質(zhì)元素為氯化鉀，最佳維生素為核黃素。 并通過(guò)二次通用旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)方法對(duì)BS80-6菌株培養(yǎng)基的最佳組合進(jìn)行了研究，建立了具有較好預(yù)測(cè)性能的培養(yǎng)基反應(yīng)模型，并用試驗(yàn)數(shù)據(jù)驗(yàn)證了該模型的可靠性，利用該模型對(duì)培養(yǎng)基最優(yōu)組合的營(yíng)養(yǎng)元素對(duì)菌體生長(zhǎng)量反應(yīng)規(guī)律及交互作用進(jìn)行了探討，并對(duì)影響該菌株生長(zhǎng)的因子進(jìn)行了比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：BS80

6、-6與BS-CK兩菌株對(duì)生長(zhǎng)因子的要求不同，五個(gè)因子對(duì)表示：BS80-6菌株生長(zhǎng)影響的順序分別為：核黃素>蛋白胨>pH>KCl>麥芽糖。五個(gè)因子對(duì)BS-CK菌菌株生長(zhǎng)影響大小順序?yàn)椋簆H>KCl>核黃素>蛋白胨>麥芽糖。兩因子交互作用對(duì)S80-6菌株生長(zhǎng)影響的大小順序?yàn)椋篨<,1>X<,3>>X<,2>X<,5>>X<,1>X<,2>>X<,2>X<,4>>X<,4>X<,5>>X<,2>X<,3>>X<,1>X<,4>>X<,1>X<

7、,5>>X<,3>X<,4>>X<,3>X<,5>,其中僅b<,13>、b<,45>、b<,23>達(dá)到顯著水平。兩因子互作對(duì)BS-CK 菌株生長(zhǎng)影響的大小順序?yàn)椋篨<,2>X<,3>>X<,2>X<,5>>X<,1>X<,4>>X<,2>X<,4>>X<,4>X<,5>>X<,2>X<,3>>X<,1>X<,4>>X<,1>X<,5>>X<,3>X<,4.>X<,3>X<,5>，其中b<,13>、b<,12>、b25達(dá)到顯著水平。為提高

8、BS80-6菌株的防治效果，對(duì)菌株生長(zhǎng)及其抗菌物質(zhì)產(chǎn)生的適宜培養(yǎng)條件進(jìn)行了初步研究，其中適宜生長(zhǎng)的pH值為7.0-8.0，適宜生長(zhǎng)的溫度條件為25-28℃，通氣量為250mL三角瓶中裝液量為50mL的條件下有利于菌株生長(zhǎng)及抗菌物質(zhì)的產(chǎn)生。并用對(duì)兩菌株生長(zhǎng)曲線的分析表明，該菌株在發(fā)酵培養(yǎng)72-80h左右生長(zhǎng)量達(dá)到最大值。 4.枯草芽孢桿菌誘變菌株對(duì)蘋果炭疽病菌抗菌機(jī)制研究 經(jīng)離子注入誘變枯草芽孢桿菌獲得高效菌株BS80-6