錳型過氧化物酶與鼻咽癌放射敏感關(guān)系研究.pdf

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文錳型過氧化物酶與鼻咽癌放射敏感關(guān)系研究姓名：曲亞明申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：耳鼻咽喉頭頸外科指導(dǎo)教師：趙素萍20100501第零章中文摘要 i v結(jié)果磷哂癌細(xì)胞株放射生物學(xué)參數(shù)在C N E l 和C N E 2 兩細(xì)胞株放射生存曲線上，每一放射劑量點(diǎn)C N E l 的細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)都高于C N E 2 。在放射敏感參數(shù)D o 、D 口、s F 2 、Q 和M I DC N E l 與C N E 2 相比的分別為：高出5

2、0 ．9 7 ％、高出2 ．3 1 倍、高出1 ．6 7 倍、少3 ．3 5 倍，Po ．0 5 ) ；C N E 2 細(xì)胞的S O D 2 蛋白量變化不明顯( P > 限0 5 l 。④構(gòu)建靶向S O D 2 的m i R N A 載體質(zhì)粒與轉(zhuǎn)染C N E I 細(xì)胞經(jīng)過質(zhì)粒D N A 測序，質(zhì)粒p c D N A T M 6 ．2 - G W ／E m G F P ．i m R - S O D ' 2 ( 4 1 1 、

3、4 2 4 和7 0 0 ) 構(gòu)建成功。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染鼻咽癌細(xì)胞C N E l ，經(jīng)檢澳n E m G F P 編碼綠色熒光蛋白，轉(zhuǎn)染成功。轉(zhuǎn)染的細(xì)胞i m R - S O D 2 a 1 1 、i m R ．S O D 2 4 2 4 、i m R - S O D 2 T O O 與未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞相比，S O D 2 的m R N A 分別下謂3 7 ％、5 2 ．1 9 ％、4 5 ．1 2 ％，PO ．0 5 ) 。⑤建立沉默S O D

4、2 的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株 經(jīng)抗生素篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染質(zhì)粒p c D N A T M 6 ．2 - G W ／E m G F P —i m R - S O D 2 7 0 0 的C N E l 細(xì)胞克隆。穩(wěn)轉(zhuǎn)i m R - S O D 2 7 0 0的C N E l 細(xì)胞與未轉(zhuǎn)染的C N E l 細(xì)胞相比，S O D 2 的m R N A 分別下調(diào)7 2 ．1 8 ％，P < 0 ．0 1 ；s o D 2 蛋白分別下調(diào)6 9 ．9 5

5、％，P < O ．0 5 。⑥沉默S O D 2 基因表達(dá)細(xì)胞放射生物學(xué)參數(shù)與基因治療實(shí)驗(yàn)在放射生存曲線上，穩(wěn)轉(zhuǎn)質(zhì)粒p c D N A T M 6 ．2 - G W ／E m G F P - i m R - S O D 2 7 0 0 的C N E l 細(xì)胞與無轉(zhuǎn)染的C N E l 細(xì)胞相比每一放射劑量的生存分?jǐn)?shù)減小，在放射生物參數(shù)S F 2 、D o 、Q 前者比后者分別降低1 ' 2 ．8 1 倍、降低2 ．4 3 、

6、升高2 ．6 8 倍，P < 0 ．0 5 。⑦通過沉默S O D 2 基因一放射增敏治療實(shí)驗(yàn) 接受基因治療敲除S O D 2 基因的C N E t 細(xì)胞與未受干擾的C N E l 細(xì)胞照射2 G y 和4 G y 的z ．線細(xì)胞的生存率，基因治療的C N E l 細(xì)胞比未受治療的C N E l 細(xì)胞分別降低2 ．5 3 倍和3 ．7 2 倍。結(jié)論鼻咽癌細(xì)胞株C N E I 相比C N E 2 的放射抵抗性高。S O D 和S O

7、 D 2 活性與鼻咽癌細(xì)胞株的放射抵抗有關(guān)，活性高的細(xì)胞的放射抵抗性大。S O D 2 蛋白表達(dá)與鼻咽癌細(xì)胞株的放射抵抗有關(guān)，蛋白表達(dá)高的細(xì)胞的放射抵抗 性大。構(gòu)建靶向s ( 刪質(zhì)粒，能夠表達(dá)m i R N A ， 下調(diào)S O D 2 基因表達(dá)，其中針對S O D 2 基因位點(diǎn)7 0 0 至7 2 1 盼m i R N A 最有效。m i R N A 沉默S O D 2 的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞，S O D 2 基因m R N A 和蛋白顯著下調(diào)，放