EZH2介導ABCA1啟動子區(qū)域DNA和組蛋白甲基化促進動脈粥樣硬化進展.pdf

1、目的：三磷酸腺苷結合盒轉(zhuǎn)運體 A1（ABCA1）是一種重要的膜蛋白轉(zhuǎn)運體，能介導細胞內(nèi)膽固醇流出，減少泡沫細胞形成，發(fā)揮抗動脈粥樣硬化（atherosclerosis, As）的作用。研究顯示表觀遺傳學影響 As發(fā)生發(fā)展，但是 DNA、組蛋白甲基化調(diào)控 ABCA1的轉(zhuǎn)錄與表達，影響膽固醇流出、泡沫細胞形成以及As發(fā)生發(fā)展的作用尚不清楚。本研究選取 THP-1/RAW264.7巨噬細胞源性泡沫細胞和apoE?/?小鼠為研究對象，探討表觀遺

2、傳學對ABCA1表達、泡沫細胞形成以及As的影響。
　　方法：通過生物信息學在線網(wǎng)站預測ABCA1發(fā)生DNA甲基化的潛在可能性，并著重分析CpG島的數(shù)量、長度、CG含量、ObsCpG/ExpCpG比值等；本課題組采用熒光定量PCR檢測THP-1/RAW264.7巨噬細胞源性泡沫細胞mRNA的表達，Western blot檢測ABCA1蛋白表達；染色質(zhì)免疫共沉淀檢測甲基化轉(zhuǎn)移酶與ABCA1啟動子的結合情況；免疫酶法檢測甲基化轉(zhuǎn)移酶以

3、及相關甲基化結合蛋白的活性；shRNA技術沉默甲基化酶后，測定EZH2對ABCA1表達對膽固醇流出的影響；油紅 O染色顯示細胞脂質(zhì)蓄積情況；蘇丹Ⅳ、HE染色、Masson三色染色檢測 apoE?/?小鼠動脈粥樣斑塊的情況；小鼠心臟標本送上海生工進行甲基化BSP測序。
　　結果：生物信息學分析顯示ABCA1定位于9號染色體9q31.1，其啟動子區(qū)域有一個優(yōu)于標準定義的CpG島.其長度為389bp， CG含量為57.4％， obser

4、ved/expected CpG比值為0.664。此CpG島在人類以及家鼠、牛等哺乳動物中具有高度保守性，100個堿基序列中有7個相同的CpG位點，并且具有TBP, Myc, FOX和STAT3等轉(zhuǎn)錄因子結合位點，得分較高。過表達EZH2增加THP-1/RAW264.7巨噬細胞的脂質(zhì)蓄積，促進泡沫細胞形成以及As發(fā)生發(fā)展。過表達EZH2組的膽固醇流出減少，ABCA1表達降低；進一步探討其機制發(fā)現(xiàn) EZH2能夠募集甲基化轉(zhuǎn)移酶1（DNMT