EZH2介導(dǎo)ABCA1啟動(dòng)子區(qū)域DNA和組蛋白甲基化促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)展.pdf

1、目的：三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體 A1（ABCA1）是一種重要的膜蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)體，能介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出，減少泡沫細(xì)胞形成，發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis, As）的作用。研究顯示表觀遺傳學(xué)影響 As發(fā)生發(fā)展，但是 DNA、組蛋白甲基化調(diào)控 ABCA1的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)，影響膽固醇流出、泡沫細(xì)胞形成以及As發(fā)生發(fā)展的作用尚不清楚。本研究選取 THP-1/RAW264.7巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞和apoE?/?小鼠為研究對(duì)象，探討表觀遺

2、傳學(xué)對(duì)ABCA1表達(dá)、泡沫細(xì)胞形成以及As的影響。
　　方法：通過(guò)生物信息學(xué)在線網(wǎng)站預(yù)測(cè)ABCA1發(fā)生DNA甲基化的潛在可能性，并著重分析CpG島的數(shù)量、長(zhǎng)度、CG含量、ObsCpG/ExpCpG比值等；本課題組采用熒光定量PCR檢測(cè)THP-1/RAW264.7巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞mRNA的表達(dá)，Western blot檢測(cè)ABCA1蛋白表達(dá)；染色質(zhì)免疫共沉淀檢測(cè)甲基化轉(zhuǎn)移酶與ABCA1啟動(dòng)子的結(jié)合情況；免疫酶法檢測(cè)甲基化轉(zhuǎn)移酶以

3、及相關(guān)甲基化結(jié)合蛋白的活性；shRNA技術(shù)沉默甲基化酶后，測(cè)定EZH2對(duì)ABCA1表達(dá)對(duì)膽固醇流出的影響；油紅 O染色顯示細(xì)胞脂質(zhì)蓄積情況；蘇丹Ⅳ、HE染色、Masson三色染色檢測(cè) apoE?/?小鼠動(dòng)脈粥樣斑塊的情況；小鼠心臟標(biāo)本送上海生工進(jìn)行甲基化BSP測(cè)序。
　　結(jié)果：生物信息學(xué)分析顯示ABCA1定位于9號(hào)染色體9q31.1，其啟動(dòng)子區(qū)域有一個(gè)優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)定義的CpG島.其長(zhǎng)度為389bp， CG含量為57.4％， obser

4、ved/expected CpG比值為0.664。此CpG島在人類以及家鼠、牛等哺乳動(dòng)物中具有高度保守性，100個(gè)堿基序列中有7個(gè)相同的CpG位點(diǎn)，并且具有TBP, Myc, FOX和STAT3等轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)，得分較高。過(guò)表達(dá)EZH2增加THP-1/RAW264.7巨噬細(xì)胞的脂質(zhì)蓄積，促進(jìn)泡沫細(xì)胞形成以及As發(fā)生發(fā)展。過(guò)表達(dá)EZH2組的膽固醇流出減少，ABCA1表達(dá)降低；進(jìn)一步探討其機(jī)制發(fā)現(xiàn) EZH2能夠募集甲基化轉(zhuǎn)移酶1（DNMT