ABCA1在逆膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)中的意義及煙酸抗動脈粥樣硬化機(jī)制的探討.pdf

1、研究背景 隨著AS和CAD的日益增加，人們對血脂的研究日益深入，過去的幾十年中，以他汀藥物為代表的以降低LDL為主的藥物在防治AS及CAD事件中占有及其重要的作用，但專家認(rèn)為他汀降脂治療效果并非最理想，對19項前瞻性流行病學(xué)調(diào)查資料進(jìn)行總結(jié)[1]，觀察到其中15項研究的結(jié)果均提示，血漿HDL-C水平與冠心病的發(fā)生率呈顯著性負(fù)相關(guān)。長期以來人們解釋HDL-C的心血管保護(hù)作用都是圍繞逆膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)(RCT)來闡述的，HDL在這一過程中

2、扮演著搬運(yùn)工的角色，ABCA1作為RCT的“守門人”也得到相當(dāng)?shù)闹匾?。提高RCT的轉(zhuǎn)運(yùn)率是防治AS及CAD事件的關(guān)鍵，在尋找以升高HDL為AS新治療靶點的研究中，HDL受體及其相關(guān)性研究顯得尤為重要。 煙酸是目前升高HDL-C最明顯的調(diào)脂藥物，但對于煙酸升高HDL-C及其抗AS機(jī)制目前的研究較少，雖已經(jīng)有文獻(xiàn)報道煙酸可增加脂肪細(xì)胞膽固醇流出率、但煙酸與ABCAl之間的相關(guān)性，以及這種相關(guān)性在煙酸抗動脈粥樣硬化機(jī)制中扮演何種角色仍

3、未有研究。 目的: 臨床研究在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激下冠心病患者單核細(xì)胞三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體Al(ABCA1)表達(dá)水平及ABCA1在動脈粥樣硬化(AS)中的作用機(jī)制?；A(chǔ)實驗對比觀察煙酸組、高膽固醇組、格列本脲組新西蘭實驗兔的單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肝細(xì)胞上.ABCA1表達(dá)量的變化；膽固醇流出率的改變；動脈粥樣硬化斑塊面積變化及其病理改變，以求明確煙酸升高高密度脂蛋白是否與其對ABCA1的作用有關(guān)，

4、能否增加膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)率，探討煙酸抗動脈粥樣硬化的機(jī)制。 方法: 臨床部分 分別取冠心病患者(42例)及正常對照者(40例)新鮮血液中的單核細(xì)胞，利用密度(1.077)梯度離心法分離，通過抗原抗體反應(yīng)PE熒光標(biāo)記ABCA1，并采用流式細(xì)胞儀檢測其在單核細(xì)胞中的表達(dá)量。再用Ox-LDL(30mg/L)刺激單核細(xì)胞24h后，觀察ABCA1表達(dá)量的變化情況，并分析兩組之間的差異及ABCA1表達(dá)量與血脂的相關(guān)性。

5、基礎(chǔ)部分 用健康雄性新西蘭白兔18只，于清潔級環(huán)境中分籠飼養(yǎng)，采用隨機(jī)表，將其分為以下3組，高膽固醇組、格列本脲組及煙酸組。分別在實驗起點(一周)及終點時間(六周)觀察個實驗組新西蘭兔血漿血脂水平。飼養(yǎng)至六周時，取外周血單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肝細(xì)胞采用抗原-抗體反應(yīng)標(biāo)記PE熒光標(biāo)記流式細(xì)胞儀檢測ABCA1的表達(dá)量；液相閃爍計數(shù)法檢測巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肝細(xì)胞3[H]-膽固醇的流出率；取主動脈全長，蘇丹IV染色、專業(yè)圖象分

6、析軟件對比觀測動脈粥樣硬化斑塊面積及HE、油紅0染色觀察病理變化；采用萃取、分光光度儀檢測主動脈組織、脂肪組織、肝組織的膽固醇含量變化。 結(jié)果： 臨床部分 冠心病組高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、載脂蛋白Al(apoA1)(分別為1.15±1.40，1.19±0.17)與正常對照組(分別為1.36±0.40，1.34±0.22)相比明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。ox-LDL刺激后兩組ABCA1表達(dá)

7、量均增加，冠心病組單核細(xì)胞ABCA1表達(dá)量與刺激后表達(dá)量增加幅度(△ABCA1)(分別為9.80±4.62，4.36±2.34)均較正常組(分別為29.35±5.17，7.43±1.51)低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。ABCA1表達(dá)量與血脂無明顯相關(guān)性(P>0.05)。 基礎(chǔ)部分 1、煙酸組可明顯升高兔外周細(xì)胞及組織的ABCA1表達(dá)量(單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、肝細(xì)胞)與高膽固醇組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)

8、。格列本脲組對單核細(xì)胞ABCA1影響不大，可明顯升高巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肝細(xì)胞上ABCA1表達(dá)，與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)。 2、基線水平各組實驗動物血脂均無明顯差異(P>0.05)。藥物處理六周后，煙酸組TG、TC、NHDL-C較對照組明顯下降(P=0.000，P=000，P=0.000)，而HDL-C、Apo-Al較對照組明顯上升(P=0.000，P=0.000)。 3、煙酸組巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞膽

9、固醇流出率較對照組明顯上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)，格列本脲組與對照組無差異.兩個實驗組肝細(xì)胞膽固醇流出率均較對照組降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)。 4、對比不同實驗組主動脈，煙酸組可見斑塊面積顯著少與對照組。冰凍切片HE染色、油紅染色可見煙酸組病變程度較對照組輕。格列本脲組粥樣硬化斑塊面積所占百分比最大(41.88±2.99)，對照組居中(35.08±1.65)，煙酸組面積最小(11.2±2.99)，各組

10、面積對比存在統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.000)。 5、煙酸組膽固醇在主動脈(1.30±0.18)、脂肪組織(1.26±0.15)、肝組織(0.71±0.08)中均較對照組主動脈(1.74±0.08)、脂肪組織(1.88±0.08)、肝組織(0.94±0.09)以及格列本脲組主動脈(2.55±0.13)、脂肪組織(2.38±0.05)、肝組織(1.39±0.13)中膽固醇少，三組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)。 6、相關(guān)

11、性分析：巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞膽固醇流出率與單核細(xì)胞ABCA1表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.938，P=0.000)(r=0.881，P=0.000)。外周血中單核細(xì)胞上ABCA1的表達(dá)量與動脈粥樣硬化面積呈明顯的負(fù)相關(guān)(r=-0.946，P=0.000)，單核細(xì)胞上ABCA1的表達(dá)量與脂肪細(xì)胞膽固醇含量(r=-0.847，P=0.000)、主動脈膽固醇含量(r=-0.741，P=0.000)也呈明顯負(fù)相關(guān)。 結(jié)論： 1、冠心病患者

12、體內(nèi)高濃度ox-LDL對ABCA1表達(dá)有抑制作用，ABCA1的損傷和異常血脂譜均使患者逆膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)(RCT)降低，在AS及冠心病的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的推動作用。 2、煙酸能明顯改善血脂譜，降低血漿TG、TC、NHDL-C，升高具有抗動脈粥樣硬化作用的HDL-C、Apo-Al，促進(jìn)血脂全面達(dá)標(biāo)； 3、煙酸升高外周細(xì)胞(單核細(xì)胞、腹腔巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞)逆膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)關(guān)鍵基因ABCA1的表達(dá)，使外周細(xì)胞中膽固醇流出率增加，提