PTEN和P27在人腦星形細胞腫瘤中的表達及意義.pdf

1、中國醫(yī)科大學碩士學位論文PTEN和P27在人腦星形細胞腫瘤中的表達及意義姓名：吳永剛申請學位級別：碩士專業(yè)：外科學指導教師：王成林20050401目的PTEN和P27均對細胞增殖起負性調控作用，它們的表達異常與腫瘤的生物學行為密切相關。本實驗在檢測原發(fā)性星形細胞腫瘤中PTEN和P27表達情況的同時，對這兩個抑癌基因的表達程度與腫瘤病理分級之間的關系進行了評估。方法一、標本來源46例原發(fā)性星形細胞腫瘤標本和10例非腫瘤腦組織標本均為中國醫(yī)

2、科大學附屬第二醫(yī)院神經外科2002年3月2004年3月手術切除標本，所有腫瘤均按照WH02000年制定的神經系統腫瘤分類標準重新確定病理診斷和分級，其中包括WHOI級11例，Ⅱ級13例，Ⅲ級12例，Ⅳ級10例。二、免疫組化染色方法全部56例標本經甲醛固定和石蠟包埋后，進行免疫組化染色，檢測PTEN和P27表達。具體步驟如下：首先將石蠟標本制成5微米厚切片，常規(guī)二甲苯脫蠟酒精至水后，浸入3％H：O：溶液中，室溫下孵育10分鐘，以阻斷內源性

3、過氧化物酶的活性。切片浸人001M枸櫞酸溶液(PH=6O)中，用500W微波爐加熱進行微波抗原修復15分鐘。切片滴加正常二抗動物血清封閉，室溫下孵育30分鐘，消除非特異性反應。切片分別滴加抗PTEN和P27單克隆抗體，在4℃恒溫箱中孵育過夜，然后滴加生物素標記的二抗，室溫下孵育90分鐘。應用超敏SP試劑盒，按照SP法常規(guī)顯色。最后用蘇木素復染切片。凡細胞漿內出現明顯棕黃色顆粒者定義為PTEN陽性細胞，細胞核內出現明顯棕黃色顆粒者定義為1