三氯乙烯對(duì)人皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞線粒體損傷及銀杏葉提取物的保護(hù)作用研究.pdf

1、研究目的：本研究通過(guò)觀察TCE對(duì)體外培養(yǎng)的人原代KC線粒體的損傷作用，并探討 GBE 的保護(hù)作用，以期深入揭示TCE的皮膚細(xì)胞毒性機(jī)制，為防治 TCE 皮膚損害和開(kāi)發(fā)有效的防護(hù)用品提供理論依據(jù)。 研究方法：體外分離的人原代KC，用無(wú)血清培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。分別給予以不同濃度(0.125、0.5和2.0 mmol/L)的TCE處理，同時(shí)設(shè)培養(yǎng)基(空白)對(duì)照組和體積濃度為1％的丙酮(溶劑)對(duì)照組；GBE保護(hù)試驗(yàn)則以不同濃度(10、50、

2、100、150 mg/L)的GBE預(yù)處理細(xì)胞2 h后再用2.0 mmol/L TCE進(jìn)行染毒。分別從功能和形態(tài)兩個(gè)方面檢測(cè)線粒體的變化。①M(fèi)TT法檢測(cè)細(xì)胞活力和線粒體酶抑制率的變化；②通過(guò)測(cè)定細(xì)胞ATP酶活力來(lái)反映其能量代謝功能的變化；③羅丹明123(Rh123)和碘化丙啶(PI)染色后利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)線粒體膜電位(ΔΨ<,m>)的改變；④透射電子顯微鏡觀察線粒體形態(tài)學(xué)改變。 結(jié)果：①細(xì)胞活力的變化：染毒時(shí)間為4 h和8 h時(shí)

3、，0.5和2.0 mmol/L TCE組細(xì)胞活力較對(duì)照組明顯降低(P<0.01)，當(dāng)染毒時(shí)間大于12 h，三個(gè)劑量組與對(duì)照組比較均有差異(P<0.01)，且隨著染毒濃度的提高細(xì)胞活力呈劑量依賴性地降低；GBE保護(hù)組細(xì)胞活力較TCE染毒陽(yáng)性組明顯升高(P<0.01)，GBE濃度提高到100和150 mg/L 時(shí)，細(xì)胞活力與溶劑對(duì)照組差異無(wú)顯著性(P>0.05)。②線粒體酶抑制率改變：染毒4 h和8 h時(shí)，0.5和2.0 mmol/L TC

4、E組線粒體酶抑制率較對(duì)照組明顯增加(P<0.01)，染毒時(shí)間>12 h，三個(gè)劑量組與對(duì)照組比較均有差異(P<0.01)，且呈劑量－效應(yīng)關(guān)系：GBE保護(hù)后線粒體酶抑制率下降(P<0.01)，100 mg/L 以上的GBE保護(hù)后線粒體酶抑制率與溶劑對(duì)照組差異無(wú)顯著性(P>0.05)。③細(xì)胞ATP酶活力變化：TCE處理4 h細(xì)胞ATP酶活力無(wú)變化，處理8 h，2.0 mmol/L 組低于對(duì)照組，TCE作用時(shí)間大于12 h，0.125、0.5和

5、2.0 mmol/L 組ATP酶活力與對(duì)照組比較差異均有顯著性；10 mg/L GBE保護(hù)組ATP酶活力與TCE染毒組差異無(wú)顯著性，50、100、150 mg/L GBE保護(hù)組ATP酶活力較TCE染毒組升高，其中100和150 mg/L GBE保護(hù)組與溶劑對(duì)照組差異無(wú)顯著性(P>0.05)。④ΔΨ<,m>改變；2.0 mmol/L TCE染毒4、8、12和24 h，Rh123熒光強(qiáng)度較對(duì)照組下降，Rh123<'->/PI<'->細(xì)胞群的

6、比例較對(duì)照組增加，8 h后變化趨于穩(wěn)定，12和24 h組與8 h組比較差異無(wú)顯著性。GBE保護(hù)組Rh123熒光強(qiáng)度較TCE染毒陽(yáng)性組明顯升高，Rh123<'->PI<'->細(xì)胞群比例下降(P<0.01)，100和150 mg/L 保護(hù)組，兩指標(biāo)與對(duì)照組差異均無(wú)顯著性(P>0.05)。⑤線粒體形態(tài)學(xué)改變：電鏡下TCE處理組線粒體出現(xiàn)腫脹，空泡變性，基質(zhì)減少，部分嵴消失，正常對(duì)照組和GBE保護(hù)組線粒體結(jié)構(gòu)完整，基質(zhì)分布均勻，可見(jiàn)線粒體嵴。