HP-Herceptin光敏免疫偶聯物的制備及體外光敏免疫效應的研究.pdf

1、第一軍醫(yī)大學碩士學位論文HPHerceptin光敏免疫偶聯物的制備及體外光敏免疫效應的研究姓名：陳璐申請學位級別：碩士專業(yè)：腫瘤學指導教師：羅榮城20060510中文摘要洗脫，收集暗紅色第一峰。3、薄層層析結果：純化后的產物呈暗紅色，用薄層層析對HP、赫賽汀及偶聯物進行層析，紫外燈下觀察，可見游離HP被展開，而偶聯物依然在點樣位置，二者均有熒光，結果表明HP和Herceptin偶聯成功。4、紫外分光光度計法：測得HP最大吸收波長3675

2、nm為測定波長。HP溶液(O001％PBS液為溶劑)的濃度為橫坐標，吸光度值為縱坐標，得回歸方程：Y=02136X一01206(R209991)，結果表明HP在1～9ttg／ml濃度范圍內線性關系良好。同法配制赫賽汀溶液，測得其最大吸收波長是2637nm。得回歸方程：Y=21274X00052(R209992)，結果表明赫賽汀在0022～011mg／ml濃度范圍內線性關系良好。由一定濃度的血卟啉在2637nm處的吸光值，根據Beer定律

3、AEcL，可計算出血卟啉在2637rim處的吸光系數E值。運用雙波長法計算偶聯物中HP及赫賽汀含量，并按公式計算偶聯物中HP和赫賽汀的摩爾比：238：1。5、HPHerceptin偶聯物和Herceptin與SK—BR3膜漿抗原(Her2表達的P185蛋白)免疫活性測定結果顯示：抗體濃度從起始濃度750581xg／ml8級倍比稀釋，抗體此濃度范圍內相對應的HerceptinA492值為0786～0096；偶聯物的A492值為0833～0

4、154。經統(tǒng)計學Pearson相關分析，兩組曲線濃度與吸光度相關度好，呈正相關關系，咖99(p=0000)。兩條曲線基本重合，說明HP—Herceptin偶聯物的免疫活性較偶聯前的Herceptin并無明顯改變。6、MTT法，在HP劑量相同的情況下，HP一赫賽汀偶聯物對BT474細胞的殺傷效果明顯優(yōu)于游離IIP及單純赫賽汀組，各組差異有統(tǒng)計學意義(p=O018)。顯微鏡下觀察，細胞的形態(tài)變化也證明了此結果，并且隨著藥物濃度的增加，細胞死