北京鴨催乳素受體基因、雌激素受體α，β基因的克隆與分析.pdf

1、我國蛋鴨、肉鴨和鵝的飼養(yǎng)量均居世界之首。其中蛋鴨存欄量占亞洲的80％、世界的66％。這標(biāo)志著我國需要更多地種鴨，選育優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的種鴨勢在必行，而傳統(tǒng)育種手段費(fèi)力費(fèi)時，分子輔助育種研究的開展為育種提供了新的思路。如果我們能找到一些與鴨繁殖性能相關(guān)的多態(tài)性位點(diǎn)，則能為我國種鴨分子輔助育種提供理論基礎(chǔ)。 催乳素受體(PRLR)作為催乳素(PRL)的特異性受體，可調(diào)節(jié)PRL的一系列生理學(xué)功能，PRLR基因位于雞z染色體上，與其繁殖性能有重

2、要關(guān)系，可作為畜禽繁殖性能的一個候選基因。有研究表明雌激素受體(ESR)也可作為繁殖性能的候選基因。 但是到目前為止，鴨催乳素受體基因和雌激素受體基因的序列還沒有報道。 本試驗(yàn)以北京鴨為材料克隆PRLR cDNA和ESR cDNA序列，分析其序列特征；使用半定量RT-PCR檢測了PRLR mRNA和ESR mRNA在北京鴨各組織中的表達(dá)情況。為北京鴨的分子育種提供理論基礎(chǔ)。 通過本文的研究，獲得以下進(jìn)展：

3、 1．利用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增獲得了北京鴨催乳素受體(dPRLR) cDNA長為2499bp的全編碼區(qū)(GenBank登錄號EF205054)，該序列包含ATG起始密碼子和TAA終止密碼子，可編碼832個氨基酸。除去24個氨基酸殘基的信號序列，成熟的dPRLR包含808個氨基酸殘基，分子量約為91.5 kDa。成熟的dPRLR的可以分為三個域，胞外域、跨膜域和胞內(nèi)域。胞外域(ECD)包含兩個串聯(lián)重復(fù)的單元，稱為遠(yuǎn)膜單元和近膜單元，分別含

4、有204和212個氨基酸。每個重復(fù)單元包含有兩對保守的Cys殘基和一個WS基序，兩個WS基序均由WSEWS構(gòu)成，兩個重復(fù)單元間具有66.7％的相似性。位于蛋白中間的跨膜域有24個氨基酸殘基。胞內(nèi)域(ICD)位于C端包含368個氨基酸殘基，在胞內(nèi)域含有兩個保守的區(qū)，分別稱為Boxl和Box2。所有這些特征同雞以及哺乳動物PRLR一致，說明北京鴨PRLR的作用機(jī)制類似于其它物種。序列相似性分析表明北京鴨PRLR同其它物種相比在核酸水平上具有

5、44.8％～96.5％的相似性，在氨基酸水平上具有29.6％～96.1％的相似性，同家鵝的相似性最高。進(jìn)化分析表明北京鴨催乳素受體與家鵝、火雞、雞、鴿子的催乳素受體進(jìn)化關(guān)系較近。半定量PCR結(jié)果顯示PKLR mRNA在北京鴨肝臟、胸肌、腎臟、睪丸、卵巢均有表達(dá)，在腎臟中的表達(dá)量最高。 2．利用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增獲得了北京鴨ESRα和ESRβ的部分cDNA序列。ESRβ部分序列長1593bp，可編碼531個氨基酸(GenBank

6、登錄號EF205052)；ESRβ部分序列長1085bp，可編碼361個氨基酸(GenBank登錄號EF621308)。序列特征分析表明，兩序列均可分為五個域A/B、C、D、E。比對分析顯示ESRα和ESRβ各域的相似性分別為：A/B為11.5％，C為90％，D為30％，E為35％。可見C域在ESRα和ESRβ中高度保守，說明ESRα和ESRβ具有相似的目標(biāo)作用基因。核定位信號預(yù)測結(jié)果表明，ESRα含有兩個核定位信號區(qū)，一個位于C域，另

7、一個位于D域；ESRβ只有一個核定位信號區(qū)位于C域。ESR mRNA表達(dá)分析表明不管ESRα還是ESRβ在母鴨中的表達(dá)量均高于公鴨。在腎臟中ESRα的表達(dá)量明顯低于ESRβ；在睪丸和卵巢中均是ESRα的表達(dá)量明顯高于ESRβ；在肝臟中兩者幾乎一樣。 3．獲得PRLR基因由1325個堿基組成的部分DNA序列(GenBank登錄號EF502053)，該序列有一個長為635bp內(nèi)含子。外顯子部分可編碼230個氨基酸。序列分析表明，該序列由第9