P物質(zhì)對大鼠心肌缺血再灌注損傷的影響及其機(jī)制.pdf

1、心肌缺血一再灌注損傷(ischemia—reperfusion injury，IRI)是指一定條件下恢復(fù)缺血區(qū)血液灌流后，不僅功能沒有得到恢復(fù)，反而會出現(xiàn)心律失常、梗死面積擴(kuò)大等現(xiàn)象，使得組織器官的損傷未減輕反而加重，是心肌梗死在臨床治療過程中普遍存在的問題。常見的臨床改變主要有心肌頓抑、再灌注心律失常、微血管功能失調(diào)和心肌細(xì)胞的凋亡等。P物質(zhì)(SP)由感覺神經(jīng)末梢釋放向中樞傳遞傷害性信號并且參與支配組織神經(jīng)源性炎癥的一種重要神經(jīng)遞質(zhì)，

2、廣泛分布于中樞、周圍神經(jīng)系統(tǒng)及心肌組織中。研究發(fā)現(xiàn)，在心肌缺血和心肌梗死的過程中，心肌組織內(nèi)SP的濃度增高，提示SP可能參與了體內(nèi)心肌缺血和心肌梗死的病理生理過程。實(shí)驗(yàn)室前期研究表明SP可顯著降低灌流心臟缺血后心律失常的發(fā)生率; SP通過調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞蛋白激酶A(PKA)活性，抑制由NE誘導(dǎo)的培養(yǎng)心肌細(xì)胞凋亡，對心肌具有保護(hù)作用。SOD是體內(nèi)清除氧自由基抗氧化酶系統(tǒng)的成員，檢測其活性能反映機(jī)體內(nèi)抗脂質(zhì)過氧化的能力。CRYAB是一種小分子熱

3、休克蛋白，占心肌總蛋白3-5％。研究表明，CRYAB作為分子伴侶，可與多種蛋白質(zhì)相互作用，促進(jìn)細(xì)胞的存活，在大鼠心臟缺血應(yīng)激情況下發(fā)揮抗凋亡，保護(hù)心肌的作用。那么心肌缺血再灌究竟對心臟產(chǎn)生什么樣的損傷？而內(nèi)源性的SP對缺血再灌導(dǎo)致的損傷發(fā)揮著什么樣的作用？SP對SOD以及CRYAB的表達(dá)是否有影響？目前尚不清楚，對此我們做了進(jìn)一步的研究。
　　 目的:
　　 研究SP對大鼠心肌缺血復(fù)灌損傷的影響，旨在從神經(jīng)源性機(jī)制研究其

4、與缺血再灌注損傷的關(guān)系，從而為臨床治療急性心肌缺血提供新的思路及靶點(diǎn)。
　　 方法:
　　 本實(shí)驗(yàn)從三個方面進(jìn)行研究
　　 1.SP對大鼠心肌缺血再灌引起室性心律失常以及血流動力學(xué)的影響:采用大鼠在體模型，健康大鼠分為假手術(shù)組S(只穿線，不結(jié)扎，持續(xù)120min)、缺血再灌注組IR（靜脈給與等體積生理鹽水）、不同濃度SP受體拮抗劑([D-Arg1,D-Phe5,D-Trp7,9,Leu(1)1]-Substanc

5、e P, D-SP)組（10-11mol/kg,10-10mol/kg和10-9 mol/kg）。對照組和各給藥組均結(jié)扎冠狀動脈左前降支30min，再灌120min，按1μl/g劑量于再灌前5min給藥。記錄分析再灌后120min內(nèi)室性心律失常的變化以及收縮壓，舒張壓，平均動脈壓，脈壓差及心率的變化。
　　 2.SP對大鼠心肌缺血再灌引起心肌細(xì)胞凋亡的影響:采用大鼠在體模型，健康大鼠分為假手術(shù)組、對照組、不同濃度SP受體拮抗劑組

6、（10-11 mol/kg，10-10mol/kg and10-9 mol/kg）。于再灌120min末提取心肌組織蛋白，采用Caspase-3活性分光光度法檢測試劑盒檢測其活性，采用氯化三苯基四氮唑(2，3，5-triphenyltetrazolium chloride staining，TTC)染色法計(jì)算心肌梗死面積(infarct size, IS),
　　 3.SP對缺血再灌大鼠心肌組織中超氧化物歧化酶(Superoxi

7、de Dismutase，SOD)以及aB晶狀體蛋白(alpha B-crystallin，CRYAB)的影響:采用大鼠在體模型，健康大鼠分為假手術(shù)組、對照組、不同濃度SP受體拮抗劑組D-SP(10-11mol/kg，10-10 mol/kg and10-9 mol/kg)。于再灌120min末提取心肌組織蛋白，采用蛋白免疫印跡(Western blot)半定量法測定SOD和CRYAB的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:
　　 1

8、.與S組比較，IR組的室性心律失常增加(P＜0.01)，和IR組相比，給藥組D-SP10-10和D-SP10-9可增高室性心律失常的發(fā)生(P＜0.01)，且以D-SP10-10的作用最為明顯，從時間分布來看，除假手術(shù)組，其余各組的心律失常發(fā)生多集中在再灌后15min，而給藥組在再灌后的25min-55 min又有一次高峰。和S組相比，IR組的收縮壓，平均動脈壓降低(P＜0.05);和IR組相比，D-SP10-9組的收縮壓升高(P＜0.0

9、5)。其余指標(biāo)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差別。
　　 2.和S組相比，IR組Caspase-3活性增加了0.20倍(P＜0.05)。和IR組相比，DSP10-10增加了0.24倍(P＜0.05); TTC染色，和IR組相比DSP10-10組的梗死面積顯著增高3倍(P＜0.01)。
　　 3.和S組相比，IR組的SOD活性降低(P＜0.05)。和IR組相比，各給藥組的SOD活性均降低(P＜0.01)，且以D-SP10-10 mol/kg作用

10、最明顯。和D-SP10-10mol/kg相比，D-SP10-9mol/kg和D-SP10-11 mol/kg組的SOD活性升高(P＜0.01);和S相比，IR組的CRYAB表達(dá)明顯升高(P＜0.01)。和IR相比，D-SP10-10 mol/kg組CRYAB表達(dá)明顯降低(P＜0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 缺血再灌可導(dǎo)致心肌損傷，D-SP可降低CRYAB和SOD表達(dá)水平以及誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡，增加大鼠缺血再灌室性心律失常