免疫因素在再生障礙性貧血發(fā)病中的作用.pdf

1、該研究應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等多種方法分析:(1)共刺激分子在AA患者體內(nèi)表達(dá)的變化,從而了解共刺激分子在AA免疫致病機(jī)制中的作用;(2)研究sCD40L對(duì)造血干細(xì)胞集落形成的影響,并建立造血干細(xì)胞體外擴(kuò)增的優(yōu)化方案;(3)研究FLIP與AA患者異常活化的T淋巴細(xì)胞之間的關(guān)系,進(jìn)一步闡明免疫紊亂的發(fā)生機(jī)制.1.AA患者外周血與骨髓sCD40L水平顯著降低.用ELISA方法檢測(cè)了40例再障患者及正常人外周血及骨髓sCD40L水平;用免

2、疫熒光標(biāo)記技術(shù)和流式細(xì)胞儀分析患者骨髓及外周血淋巴細(xì)胞的表型,并分析了患者sCD40L水平與外周血粒細(xì)胞、血小板計(jì)數(shù)和淋巴細(xì)胞表型變化的關(guān)系.2.sCD40L聯(lián)合其他造血生長(zhǎng)因子促進(jìn)臍血CD34<'+>細(xì)胞體外集落生成.用造血干細(xì)胞體外集落形成試驗(yàn)的方法,觀察sCD40L、SCF+IL-3+GM-CSF+EPO及sCD40L+SCF+IL-3+GM-CSF+EPO對(duì)臍血造血干細(xì)胞體外造血集落形成的影響.結(jié)果表明,單獨(dú)應(yīng)用sCD40L培養(yǎng)

3、臍血造血干細(xì)胞時(shí)并無明顯的集落形成.SCF、IL-3、EPO、GM-CSF聯(lián)合應(yīng)用時(shí),集落形成的數(shù)量和形態(tài)都較小;但當(dāng)sCD40L與SCF、IL-3、EPO、GM-CSF聯(lián)合應(yīng)用時(shí),sCD40L能顯著增強(qiáng)SCF、IL-3、EPO、GM-CSF促進(jìn)造血干細(xì)胞的增殖并促進(jìn)集落的形成.提示,sCD40L與SCF、IL-3、EPO、GM-CSF聯(lián)合應(yīng)用對(duì)造血細(xì)胞體外擴(kuò)增更為有效,sCD40L與其他造血因子聯(lián)合應(yīng)用可能是臨床促進(jìn)AA、放、化療后造

4、血功能恢復(fù)更為優(yōu)化的方案.3.AA患者不同T細(xì)胞亞群CD28表達(dá)的異常.采用雙色免疫熒光標(biāo)記和流式細(xì)胞儀分析AA患者以CyA治療前后CD4<'+>和CD8<'+>T細(xì)胞表面CD28表達(dá)的變化及患者外周血T細(xì)胞以CyA培養(yǎng)后CD28表達(dá)的變化.4.AA患者T淋巴細(xì)胞FLIP表達(dá)的變化及其意義.用RT-PCR的方法檢測(cè)AA患者治療前后外周血T細(xì)胞的FLIPmRNA和Caspase-8 mRNA的表達(dá)變化,以及患者治療前的外周血T細(xì)胞以CyA