免疫因素在再生障礙性貧血發(fā)病中的作用.pdf

1、該研究應(yīng)用細胞生物學和分子生物學等多種方法分析:(1)共刺激分子在AA患者體內(nèi)表達的變化,從而了解共刺激分子在AA免疫致病機制中的作用;(2)研究sCD40L對造血干細胞集落形成的影響,并建立造血干細胞體外擴增的優(yōu)化方案;(3)研究FLIP與AA患者異?；罨腡淋巴細胞之間的關(guān)系,進一步闡明免疫紊亂的發(fā)生機制.1.AA患者外周血與骨髓sCD40L水平顯著降低.用ELISA方法檢測了40例再障患者及正常人外周血及骨髓sCD40L水平;用免

2、疫熒光標記技術(shù)和流式細胞儀分析患者骨髓及外周血淋巴細胞的表型,并分析了患者sCD40L水平與外周血粒細胞、血小板計數(shù)和淋巴細胞表型變化的關(guān)系.2.sCD40L聯(lián)合其他造血生長因子促進臍血CD34<'+>細胞體外集落生成.用造血干細胞體外集落形成試驗的方法,觀察sCD40L、SCF+IL-3+GM-CSF+EPO及sCD40L+SCF+IL-3+GM-CSF+EPO對臍血造血干細胞體外造血集落形成的影響.結(jié)果表明,單獨應(yīng)用sCD40L培養(yǎng)

3、臍血造血干細胞時并無明顯的集落形成.SCF、IL-3、EPO、GM-CSF聯(lián)合應(yīng)用時,集落形成的數(shù)量和形態(tài)都較小;但當sCD40L與SCF、IL-3、EPO、GM-CSF聯(lián)合應(yīng)用時,sCD40L能顯著增強SCF、IL-3、EPO、GM-CSF促進造血干細胞的增殖并促進集落的形成.提示,sCD40L與SCF、IL-3、EPO、GM-CSF聯(lián)合應(yīng)用對造血細胞體外擴增更為有效,sCD40L與其他造血因子聯(lián)合應(yīng)用可能是臨床促進AA、放、化療后造

4、血功能恢復更為優(yōu)化的方案.3.AA患者不同T細胞亞群CD28表達的異常.采用雙色免疫熒光標記和流式細胞儀分析AA患者以CyA治療前后CD4<'+>和CD8<'+>T細胞表面CD28表達的變化及患者外周血T細胞以CyA培養(yǎng)后CD28表達的變化.4.AA患者T淋巴細胞FLIP表達的變化及其意義.用RT-PCR的方法檢測AA患者治療前后外周血T細胞的FLIPmRNA和Caspase-8 mRNA的表達變化,以及患者治療前的外周血T細胞以CyA