調(diào)節(jié)性T細胞在再生障礙性貧血發(fā)病機制中的作用.pdf

1、再生障礙性貧血(AA)是由多種病因、多種發(fā)病機理引起的骨髓造血功能衰竭、造血細胞數(shù)量減少所引發(fā)的，以貧血、出血和感染為主要癥狀的一組異質(zhì)性疾病。再障發(fā)病機理較為復(fù)雜，以往認為再障的發(fā)生與造血干細胞損傷、造血微環(huán)境缺陷及免疫介導(dǎo)有關(guān)，三種機制在不同的患者個體中單獨或聯(lián)合作用，導(dǎo)致造血功能衰竭。近年來越來越多的學(xué)者認識到免疫機制紊亂尤其是細胞免疫功能紊亂在再障發(fā)病中的作用，已成為再障基礎(chǔ)研究方面一個最活躍的領(lǐng)域。因此，繼續(xù)深入探討免疫學(xué)發(fā)病

2、機理具有重要的理論意義和實用價值。 近十年來，有研究表明有一組T細胞可以在體內(nèi)和體外抑制T細胞反應(yīng)，在一些體外建立的自身免疫性疾病的動物模型中，人們發(fā)現(xiàn)了這群細胞，它的存在可以預(yù)防自身免疫反應(yīng)的發(fā)生?，F(xiàn)在越來越多的研究表明機體內(nèi)存在著一系列針對自身反應(yīng)性T細胞的免疫調(diào)節(jié)機制，除了克隆清除、克隆無能和免疫忽視等被動機制外，胸腺產(chǎn)生的調(diào)節(jié)性T細胞(17-regs)所介導(dǎo)的免疫抑制作用是一種重要的主動機制，可通過與細胞的直接接觸或分泌

3、抑制性的細胞因子如IL-10、轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)，發(fā)揮抑制自身反應(yīng)、維持自身免疫耐受的重要作用。一旦去除T-regs或T-regs功能障礙即可導(dǎo)致各種自身免疫性疾病的產(chǎn)生。 骨髓間充質(zhì)干細胞(MSC)是骨髓微環(huán)境中一種重要的具有多向分化潛能的非造血細胞，最新研究表明，MSC具有免疫調(diào)節(jié)作用、造血支持作用，對造血干細胞(HSC)具有肯定的擴增作用，MSC是HSC體外擴增的理想滋養(yǎng)層細胞，也是體內(nèi)理想造血微環(huán)境。

4、鑒此，本研究通過體外建立再生障礙性貧血動物模型，來探討在再障的免疫發(fā)病機制中，調(diào)節(jié)性T細胞所發(fā)揮的作用，以此來探討再障的治療中，可能的新的治療途徑。并利用胎源性骨髓間充質(zhì)干細胞在體外培養(yǎng)，進行再生障礙性貧血的治療，以研究MSC可以促進造血植入，并探討其臨床應(yīng)用前景，并為再障的治療提出新的治療途徑。 目的：研究調(diào)節(jié)性T細胞在導(dǎo)致再生障礙性貧血發(fā)病的免疫機制作用中的作用。并體外培養(yǎng)胎源性間充質(zhì)干細胞，以探討治療再障可能的新的途徑。

5、 方法：取B6(C57BL/6)和BALB/cBy小鼠，培育產(chǎn)生cBy/B<,6>F<,1>。體外利用B6的淋巴細胞建立再生障礙性貧血的動物模型，用流式細胞術(shù)檢測在動物模型中調(diào)節(jié)性T細胞的表達。通過與正常小鼠的比較，來探討在再生障礙性貧血的發(fā)病機制中調(diào)節(jié)性T細胞可能的作用。取流產(chǎn)胎兒(12-16周)股骨骨髓細胞，培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞并傳代，并注射入形成再障的小鼠體內(nèi)，以觀察其對造血的支持作用及調(diào)節(jié)性T細胞的變化。 結(jié)果：cBy

6、/B<,6>F<,1>在注射入其父本B6的淋巴結(jié)提取的細胞懸液后，大約淋巴細胞數(shù)在10-40×10<'6>*鼠，可引起全血細胞減少，經(jīng)骨髓細胞涂片檢查及骨髓活檢檢查證實為再生障礙性貧血，進行外周血流式細胞檢測，發(fā)現(xiàn)CD4<'+>CD25<'+>、CD8<'+>CD28<'->的調(diào)節(jié)性T細胞的顯著減少，以及CD103、CD152、GITR陽性細胞表達的減少和CD62L的增多。取流產(chǎn)胎兒的骨髓細胞培養(yǎng)的細胞呈紡錘形外觀，傳代至F2代時細胞形

7、態(tài)為均一的長梭形。表型檢測示該類細胞高表達CD29、CD44、CD49E，低表達CD106、CD54、CD11b，而不表達造血細胞標志CD34。將培養(yǎng)傳代的骨髓間充質(zhì)干細胞，回輸．AA小鼠后，發(fā)現(xiàn)可以使小鼠的外周血造血部分恢復(fù)，造血功能改善后，CD4<'+>CD25<'+>、CD8<'+>CD28<'+>調(diào)節(jié)性T細胞的升高。 結(jié)論：再生障礙性貧血模型中出現(xiàn)了CD4<'+>CD25<'+>和CD8<'+>CD28<'->的降低，C

8、D8<'+>CD28<'+>的升高，CD8<'+>CD25<'+>、 CD4<'+>CD28<'+>、CD4<'+>CD152<'+>、CD8<'+>CD152<'+>、CD4<'+>CD103<'+>、CD8<'+>CD103<'+>、CD4<'+>GITR均出現(xiàn)了不同程度的降低，而CD4<'+>CD62L<'+>、CD8<'+>CD62L<'+>出現(xiàn)了升高，這可能與調(diào)節(jié)性T細胞的減低，對自身免疫反應(yīng)的抑制作用削弱有關(guān)。再障患者中T淋

9、巴細胞處于活化狀態(tài)，并于發(fā)病前T細胞向骨髓組織選擇性定向歸巢活化增殖，繼而引發(fā)骨髓干/祖細胞損傷和造血衰竭。CD62表達的異常升高，介導(dǎo)了活化的T淋巴細胞向骨髓組織的歸巢，而調(diào)節(jié)性T細胞的比例下調(diào)，使對于活化的T淋巴細胞對于自身的免疫應(yīng)答反應(yīng)的抑制作用減弱，從而產(chǎn)生了針對自身骨髓的損傷反應(yīng)。而胎源性間充質(zhì)干細胞的輸入，可以引起造血的恢復(fù)，從而證實了MSC可以促進造血植入，MSC與HSC聯(lián)合輸入可提高HSC移植的成功率，降低移植物抗宿主病