調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及TGF-β1在再生障礙性貧血患兒外周血中的變化及意義.pdf

1、再生障礙性貧血(aplastic anemia，AA)簡稱再障，是由多種病因引起的骨髓造血功能衰竭，從而導(dǎo)致全血細(xì)胞生成減少的一種疾病，也是兒童時期常見的難治性血液病之一，目前有關(guān)再障的發(fā)病機制尚未完全闡明。自從1904年Chauffard首次提出再障的名稱后，人們便對其病因和發(fā)病機制進行了不斷的探索。以往認(rèn)為，再障的發(fā)病機制主要包括造血干/祖細(xì)胞本身的缺陷、造血微環(huán)境損傷和免疫異常等；三種機制在不同患者中單獨或聯(lián)合作用，導(dǎo)致骨髓造血功

2、能衰竭。近年來研究認(rèn)為，再障的發(fā)病機制呈明顯異質(zhì)性，免疫介導(dǎo)致病機制在再障的發(fā)病中起重要作用，多數(shù)再障是T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病；用免疫抑制劑如抗人胸腺球蛋白(ATG)以及環(huán)孢菌素A(CsA)等能夠使70％以上再障患者治療有效，進一步證實再障患者存在免疫機制異常。
　　 T細(xì)胞是機體免疫系統(tǒng)中的主要效應(yīng)細(xì)胞，它通過對抗原識別、處理、遞呈等作用，從而維持機體免疫功能的生理狀態(tài)。近年來研究發(fā)現(xiàn)，CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(

3、regulatory T cell，Treg cell)是具有維持自身免疫自穩(wěn)作用的T細(xì)胞亞群，該細(xì)胞數(shù)量減少和(或)功能喪失常導(dǎo)致自身免疫性疾病的發(fā)生，其分泌的轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)在這個過程中可能發(fā)揮了重要作用；目前有關(guān)CD4+CD25+Treg細(xì)胞的表面標(biāo)志物研究較多，但均缺乏特異性；轉(zhuǎn)錄因子Foxp3(foxhead/winged helix transpeription factor P3)已被證實是最可靠及特異的C

4、D4+CD25+Treg細(xì)胞內(nèi)的表面標(biāo)志，但檢測時須破膜固定染色，從而破壞Treg細(xì)胞的完整性，影響后續(xù)研究。新近研究顯示，在正常人外周血T淋巴細(xì)胞中CD127和Foxp3的表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)；具有抑制活性的Treg細(xì)胞表面低表達(dá)CD127，而自身活化的效應(yīng)T細(xì)胞則高表達(dá)CD127，因此CD127可以很好地區(qū)分調(diào)節(jié)T細(xì)胞及活化T細(xì)胞。目前認(rèn)為CD127是Yreg細(xì)胞最理想的表面標(biāo)志物。目前有關(guān)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在再障發(fā)病機制方面的研究國內(nèi)外已有

5、少量報道，但多為成人再障方面的研究，在兒童再障中的作用研究較少。
　　 目的
　　 研究再障患兒及正常兒童外周血中TGF-β1、Treg細(xì)胞及相關(guān)基因Foxp3的表達(dá)水平，探討其在再障免疫發(fā)病機制中的作用，可能為闡明再障免疫發(fā)病機制和尋找新的免疫調(diào)控治療策略提供有價值的實驗依據(jù)。
　　 材料與方法
　　 研究對象為30例再障患兒，其中SAA組9例，CAA組21例，正常對照組15例，各組之間性別、年齡差異均

6、無統(tǒng)計學(xué)意義。再障患兒均為初治，既往均未輸血及接受免疫抑制劑治療。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血 Treg細(xì)胞的表達(dá)水平；提取細(xì)胞總RNA，用RT-PCR方法擴增Foxp3基因、擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳，用quantiscan分析軟件分析條帶，以擴增產(chǎn)物條帶灰度與β-actin擴增產(chǎn)物條帶灰度之比值表示Foxp3 mRNA的相對表達(dá)水平；用ELISA法檢測TGF-β1。實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分

7、析，以單因素方差分析進行多組間比較，組間比較采用LSD法，相關(guān)分析用pearson線性相關(guān)分析方法，以α=0.05為檢驗水準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　　 1.與正常對照組相比，急、慢性再障患兒外周血CD4+T細(xì)胞、CD4+CD25+及CD4+CD25+CD127low占CD4+T細(xì)胞的百分比均降低(P<0.05)，且SAA組與CAA組相比，SAA組低于CAA組(P<0.05)。
　　 2.急性再障患兒外周血中Foxp3

8、 mRNA的表達(dá)水平為(0.47±0.08)％，而慢性再障與對照組外周血中的表達(dá)水平分別為(0.68±0.14)％和(0.71±0.12)％，(P<0.05)，后兩者比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 3.急、慢性再障患兒組TGF-β1表達(dá)水平分別為(10.72±3.35)和(18.26±5.05)ng/ml(P<0.05)，兩組與正常對照組(36.88±6.41)ng/ml相比均明顯降低(P<0.011。
　　

9、 4.相關(guān)性分析
　　 4.1再障患兒外周血CD4+CD25+CD127low Treg百分?jǐn)?shù)與TGF-β1表達(dá)水平無明顯相關(guān)性(r=0.136，P>0.0S)。
　　 4.2急性再障患兒CD4+CD25+CD127lowTreg細(xì)胞與Foxp3 mRNA表達(dá)水平呈高度正相關(guān)(r=0.76，P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.再障患兒外周血Treg細(xì)胞和Foxp3 mRNA表達(dá)減低，可能在再障的發(fā)