山東地區(qū)EBV核抗原3C基因多態(tài)性的研究.pdf

1、目的:EB病毒(Epstein.BarrVirus,EBV)屬皰疹病毒科γ亞科成員,與多種人類腫瘤的發(fā)生密切相關(guān),如Burkit's淋巴瘤(Burkitt'slymphoma,BL)、何杰金病(Hodgkin'sdisease,HD)、鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)、乳腺癌以及胃癌(gastriccarcinoma,GC)等。有研究表明有超過(guò)90%成人感染過(guò)EBV,但EBV相關(guān)腫瘤的分布則具有明顯的地域

2、性和人群傾向性,除環(huán)境因素和遺傳因素外,是否存在與EBV相關(guān)腫瘤有關(guān)的EBV基因變異一直是倍受關(guān)注的熱點(diǎn)問(wèn)題。本研究選擇我國(guó)山東地區(qū)EBV陽(yáng)性NPC、EBV相關(guān)胃癌(EBVassociatedgastriccarcinoma,EBVaGC)和健康人群咽漱液(throatwashing,TW)作為研究對(duì)象,對(duì)EBV核抗原3C(EBVnuclearantigen3C,EBNA3C)基因的多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè)和分析,旨在探討EBV基因多態(tài)性及其在E

3、BV陽(yáng)性NPC和EBVaGC發(fā)生中的意義。
　　 方法:①聚合酶鏈反應(yīng)(polymerasechainreaction,PCR)結(jié)合DNA測(cè)序檢測(cè)EBV陽(yáng)性NPC,EBVaGC,TW標(biāo)本中EBNA3C基因的多態(tài)性,應(yīng)用DNAStar5.0軟件中MegAlign對(duì)序列進(jìn)行對(duì)比分析,并與EBV標(biāo)準(zhǔn)株B95-8序列進(jìn)行比較。②根據(jù)測(cè)序結(jié)果,將其序列標(biāo)準(zhǔn)化處理之后,應(yīng)用DNAStar5.0軟件生成系統(tǒng)樹。③根據(jù)各基因出現(xiàn)的共有突變結(jié)合系

4、統(tǒng)樹對(duì)各基因變異進(jìn)行分類,初步分析基因變異對(duì)相關(guān)基因功能的影響。④比較NPC、EBVaGC和健康人群EBNA3C基因分型及基因變異各類型的分布,并與以往文獻(xiàn)發(fā)表的相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較和分析,以探尋具有中國(guó)北方特異性的變異。
　　 結(jié)果:103例標(biāo)本成功進(jìn)行PCR擴(kuò)增及測(cè)序,包括26例EBVaGC,50例NPC及27例健康成人咽漱液,根據(jù)測(cè)序結(jié)果及系統(tǒng)樹,所有標(biāo)本又可以分為三個(gè)亞型,分別為3C-5,3C-6,3C-12。
　　

5、 ①3C-6亞型為主要亞型,見(jiàn)于17例EBVaGCs(17/26,65.4%),25例NPC(25/50,50.0%)以及14例TW(14/27,51.9%)。此亞型共發(fā)現(xiàn)有6個(gè)共有突變,分別為氨基酸655(Gly→Ser),677(Thr→Met),683(Ala→Val),687(Cys→Thr),701(Glu→Gln)和246(gta→gtg)。
　　 ②3C-12亞型為次要亞型,見(jiàn)于8例EBVaGCs(8/2630.8

6、%),11例NPC(11/5022.0%)以及6例TW(6/2722.2%)。共鑒定出12個(gè)共有突變,分別為AA208(gcc→gct),213(Gln→His),336(Glu→Asp),337(cac→cat),AA348(Ile→Leu),AA367(gaa→gag),370(agt→agc),414(aag→aaa),467(ccg→cct),656(Arg→Gly),687(Cys→Thr),701(Glu→Gln)。

7、　　 ③3C-5共有5個(gè)共有突變,分別為AA348(Ile→Leu),AA367(gaa→gag),370(agt→agc),687(Cys→Thr),701(Glu→Gln)。此亞型見(jiàn)于1例EBVaGC(1/263.8%),14例NPC(14/5028.0%)以及7例TW(7/2725.9%)。
　　 ④抗原表位突變。EBNA3C8個(gè)抗原表位中共有4個(gè)發(fā)生表位突變,分別為QNG(213Gln→His),LRG(254Gln→

8、His),KEH(336Glu→Asp)和FRK(348Ile→Leu),其他表位高度保守。
　　 ⑤統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示,EBVaGC,NPC及TW中EBNA3C各基因亞型的分布無(wú)顯著性差異(P=0.17)
　　 結(jié)論:
　　 ①3C-6亞型是中國(guó)山東地區(qū)主要亞型,見(jiàn)于56例標(biāo)本中(54.4%,56/103)。變異類型與中國(guó)南方和日本地區(qū)基本相同。
　　 ②EBNA3C各亞型在EBVaGC、NPC和健康人