山東地區(qū)非綜合征性唇腭裂與MTHFR基因C677T和BMP4基因T538C多態(tài)性的相關性研究.pdf

1、一、目的和意義
　　 1.目的
　　 1.1研究亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因C677T多態(tài)性與山東地區(qū)非綜合征性唇腭裂(NSCL/P)的相關性。
　　 1.2研究骨形態(tài)發(fā)生蛋白4(BMP4)基因T538C多態(tài)性與山東地區(qū)非綜合征性唇腭裂(NSCL/P)的相關性。
　　 1.3研究亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因C677T和骨形態(tài)發(fā)生蛋白4(BMP4)基因T538C多態(tài)性在山東地區(qū)非綜合征性

2、唇腭裂的致病中是否存在關聯(lián)性。
　　 2.意義
　　 2.1從分子生物學水平研究亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因C677T和骨形態(tài)發(fā)生蛋白4(BMP4)基因T538C多態(tài)性與NSCL/P的關系,探討NSCL/P發(fā)生的機制。
　　 2.2確定非綜合征性唇腭裂的易感基因,為NSCL/P的出生進行風險評估。進一步為臨床有效的預防和監(jiān)測唇腭裂缺陷兒的出生提供依據(jù),有利于我國的計劃生育和優(yōu)生優(yōu)育工作。
　　

3、二、方法
　　 1.本研究于2008年10月在山東大學口腔醫(yī)學院山東省口腔生物醫(yī)學重點實驗室、山東省優(yōu)生技術重點實驗室進行。對2005年8月至2008年10月曾在山東大學齊魯醫(yī)院口腔頜面外科采取手術治療的來自山東地區(qū)的NSCL/P患者家庭66組和同期健康查體的正常家庭50組進行檢測。
　　 2.按要求采集患者家庭成員和對照組家庭成員的外周血液。用常規(guī)酚/氯仿抽提法提取DNA,其濃度用紫外分光光度計測定。DNA熱循環(huán)儀進行

4、PCR擴增。(已知引物、PCR反應體系)采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態(tài)性分析(PCR-RFLP)方法檢測基因型。酶切產(chǎn)物電泳分離及銀染顯色后觀察結果。
　　 3.分別統(tǒng)計患者組和對照組個體及家庭成員的基因型和等位基因,通過Hardy-Weinberg平衡檢測,并用SAS統(tǒng)計軟件進行x2檢驗計算病例組與對照組基因型及等位基因頻率的差別及構成比的差別,相關風險值分析和95％可信區(qū)間的計算以及相關性的檢測。
　　 三、結

5、果
　　 1.MTHFR基因對MTHFR C677T基因進行分析,計算得到攜帶T等位基因的父母的子代患非綜合征性唇腭裂的危險性是不攜帶T等位基因的父母的子代的2.278倍;TT突變純合子患非綜合征性唇腭裂的危險性是非TT純合子的4.690倍;母子都足TT突變純合子的子代患非綜合征性唇腭裂的危險性是非母子都是TT純合子的子代3.296倍。
　　 2.BMP4基因對BMP4 T538C基因進行分析,計算得到攜帶C等位基因的父

6、母的子代患非綜合征性唇腭裂的危險性是不攜帶C等位基因的父母的子代的1.914倍:CC突變純合子患非綜合征性唇腭裂的危險性是非CC純合子的3.375倍。
　　 3.MTHFR基因C677T和BMP4基因T538C多態(tài)性的聯(lián)合作用與非綜合征性唇腭裂的關系由非條件Logistic回歸模型計算,以MTHFR(CC)基因型和BMP4(TT)基因型為參照,統(tǒng)計結果顯示,P均>0.05,結果無明顯統(tǒng)計學意義。
　　 四、結論
　

7、　 1.山東地區(qū)NSCL/P與MTHFR基因C677T的多態(tài)性相關,與父母的基因型存在聯(lián)系。T基因在母子組合的研究中有統(tǒng)計學意義,父母傳遞給子代的T等位基因對后代的患病有重要作用。
　　 2.山東地區(qū)NSCL/P與BMP4基因T538C的多態(tài)性相關,與父母的基因型存在聯(lián)系。C基因在母子組合的研究中有統(tǒng)計學意義,父母傳遞給子代的C等位基因對后代的患病有重要作用。
　　 3.MTHFR基因C677T和BMP4基因T538C