單胺類神經(jīng)遞質(zhì)和尿酸色譜-光譜分析新方法的研究.pdf

1、單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，包括兒茶酚胺類和吲哚乙酸類，在評價中樞神經(jīng)系統(tǒng)的活性，解釋疾病發(fā)病機(jī)制和診斷許多疾病起著至關(guān)重要的作用。兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)與人類的疾病密切相關(guān)，主要包括去甲腎上腺素(NE)，腎上腺素(EP)和多巴胺(DA)。單胺類神經(jīng)遞質(zhì)在體內(nèi)的含量高或低均可導(dǎo)致一些疾病，例如腦中多巴胺的缺少導(dǎo)致帕金森病和精神分裂癥。作為主要的吲哚乙酸類神經(jīng)遞質(zhì)，5-羥色胺(5-HT)與抑郁癥和偏頭痛等神經(jīng)系統(tǒng)疾病有著密切的聯(lián)系。由于這些神經(jīng)遞質(zhì)在診斷

2、和治療疾病過程中的重要作用，因此有必要建立一個簡單、快速、靈敏的檢測方法。然而，這些神經(jīng)遞質(zhì)在體內(nèi)含量低且容易被氧化，開發(fā)一種新的分離分析方法仍舊是一種巨大的挑戰(zhàn)。
　　尿酸是嘌呤代謝的最終產(chǎn)物，正常人體內(nèi)含量在0.13-0.46mM之間，高尿酸血癥與血液和尿液中的尿酸含量有著密切的關(guān)系，并且可以導(dǎo)致一系列的并發(fā)癥，例如關(guān)節(jié)炎，心血管疾病及神經(jīng)疾病等。因此，頻繁的檢測和嚴(yán)格的控制血液和尿液中的尿酸濃度有利于阻止高尿酸血癥和降低并發(fā)

3、癥的發(fā)生。已經(jīng)報道的檢測尿酸的分析方法包括化學(xué)發(fā)光法，熒光法，電化學(xué)發(fā)，高效液相色譜法和毛細(xì)血管法。在這些方法中，有的方法缺乏分析選擇性，而有的方法存在著耗時等缺點。例如，生物樣品中與尿酸共存的抗壞血酸可影響尿酸的檢測，因為這兩種化合物有著相同的氧化電位。因此，在臨床上診斷和治療高尿酸血癥過程中，有必要建立一個選擇性好和靈敏度高的檢測尿酸的方法。
　　化學(xué)發(fā)光是近些年發(fā)展起來的一種新的檢測器，其靈敏度高、儀器簡單便宜和可以與分離手

4、段如高效液相色譜聯(lián)用倍受青睞，特別是近些年與貴金屬納米的聯(lián)用檢測痕量物質(zhì)成為一種新的方法。本文首次建立HPLC偶聯(lián)Ag(Ⅲ)-魯米諾化學(xué)發(fā)光方法，該體系可同時檢測NE，EP，DA和5-HT，并對該體系影響因素進(jìn)行了探討，利用紫外光譜探討了其發(fā)光的機(jī)制并且將該體系應(yīng)用到大鼠腦中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的檢測。另外，比色法傳感器由于其儀器設(shè)備簡單、待測物無需純化、可實時檢測反應(yīng)的動態(tài)過程等特性是研究熱點之一。本研究基于尿酸酶與尿酸的酶促反應(yīng)和三角形納

5、米銀片的表面等離子體共振，建立起檢測人體血中尿酸的含量。與其他檢測尿酸的方法比較，該方法具有原理簡單、不需要昂貴的儀器以及低的技術(shù)要求等特點，并成功地運(yùn)用到檢測人血液中尿酸的含量。具體工作如下：
　　第一部分：高效液相色譜偶聯(lián)[Ag(HIO6)2]5--魯米諾化學(xué)發(fā)光體系檢測單胺類神經(jīng)遞質(zhì)
　　本研究基于[Ag(HIO6)2]5--魯米諾化學(xué)發(fā)光體系，建立了同時檢測大鼠腦中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的簡單快速的化學(xué)發(fā)光分析法。這是首次將

6、[Ag(HIO6)2]5--魯米諾化學(xué)發(fā)光體系與高效液相色譜聯(lián)用。在堿性溶液中，去甲腎上腺素(NE)、腎上腺素(EP)、多巴胺(DA)和5-羥色胺(5-HT)能顯著增強(qiáng)[Ag(HIO6)2]5--魯米諾化學(xué)發(fā)光體系。實驗研究了高效液相色譜的分離條件，[Ag(HIO6)2]5-和魯米諾的濃度以及pH值對于發(fā)光體系的影響。結(jié)果顯示，液相色譜條件在甲醇：0.2％磷酸為5:95的條件下等度洗脫，11min內(nèi)能夠?qū)E、EP、DA和5-HT分開。

7、在最優(yōu)的化學(xué)發(fā)光條件下，本體系對NE、EP、DA和5-HT的檢測限分別為4.8、0.88、1.9和2.3ng/mL。利用本法成功測定了大鼠腦中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量，回收率超過93.4%，日內(nèi)和日間精密度均小于6.0%。
　　第二部分基于三角形納米銀片-尿酸酶侵蝕原理的比色法高選擇性和高靈敏度的檢測人體血液中的尿酸含量
　　由于尿酸在生理和病理進(jìn)程中的關(guān)鍵作用，直接選擇性的和靈敏度的傳感人體血液中的尿酸含量是非常重要的。因此，

8、本文建立了一個簡單而又有效的尿酸傳感，主要是基于三角形納米銀片的形態(tài)改變來比色傳感尿酸?；驹硎窃谀蛩崦傅拇嬖冢蛩岜谎趸a(chǎn)生H2O2，三角形納米銀片被H2O2侵蝕由三角形轉(zhuǎn)變成球形，導(dǎo)致超過120 nm紫外吸收峰的藍(lán)移。溶液的顏色與尿酸的濃度有關(guān)，且可以通過肉眼觀察到顏色變化由淡藍(lán)色變成紫色。三角形納米銀片的表面等離子體共振藍(lán)移程度和尿酸的濃度在1.0到40μM范圍內(nèi)成線性相關(guān)，檢測限為0.7μM。選擇性實驗表明在血液中一些潛在的干

9、擾物質(zhì)沒有干擾。血樣本離心后可直接加入到三角形納米銀片?尿酸酶體系中而不需要其他處理。三角形納米銀片-尿酸酶傳感器成功地運(yùn)用到人體血液中尿酸的檢測，回收率在95%以上。測得的結(jié)果與生化分析儀器進(jìn)行對比，相對誤差為5.1%。整個實驗可以在一個小時之內(nèi)完成且不需要昂貴的儀器，從而避免了現(xiàn)有方法的耗時和使用頂尖的裝備等缺陷。該生物傳感器具有選擇性好和靈敏度高，簡單的樣品處理，低消耗和快速檢測等特點。因此，該方法在生物分析和臨床診斷中具有很大潛