染色體端粒長度與肝癌發(fā)病及預后關系的實驗研究.pdf

1、肝癌因其起病隱匿、病情發(fā)展快和缺乏有效的治療手段等臨床特點嚴重危害人民健康。因此，對肝癌發(fā)生發(fā)展分子機制的研究并結(jié)合肝癌患者臨床資料尋找有效的高危人群篩查和預后判斷的標志物具有重要意義。
　　端粒長度異常參與肝癌發(fā)生發(fā)展過程。除病毒感染、酗酒、黃曲霉素、吸煙和藥物等環(huán)境因素外，越來越多的研究關注遺傳易感因素在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用。以往大量臨床研究表明，端粒長度異常所致的基因組不穩(wěn)定參與多種腫瘤的發(fā)生及進展；尤其是外周血的平均端粒長

2、度可能作為潛在生物標志物預測多種惡性腫瘤的發(fā)病及預后。此外，多項研究證實端粒長度在肝硬化、癌旁以及肝癌組織中進行性縮短，說明端粒長度參與了肝癌的發(fā)生及進展。然而關于外周血的平均端粒長度和肝癌發(fā)生發(fā)展關系的研究尚未見報道。本實驗正是基于這個研究現(xiàn)狀，利用外周血樣本進一步探討外周血的平均端粒長度是否參與了肝癌的發(fā)生及進展，并初步評估外周血的平均端粒長度在對肝癌預防、早期高危人群篩查和肝癌預后的意義。本課題研究包括兩部分：
　　第一部分

3、：染色體端粒長度與肝癌發(fā)病關系的研究
　　本實驗采用病例對照研究方法，選取240例HBV(Hepatitis B virus)感染的肝癌患者作為病例組、120例HBV感染的慢性肝疾病患者作為慢性肝疾病對照組和240例健康人群作為健康對照組，收集3組人群的外周血樣本、提取基因組DNA以及相關的流行病學資料，利用實時定量PCR的方法檢測3組樣本的平均端粒長度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，肝癌病例組外周血的平均端粒長度顯著長于慢性肝疾病組和健康對照組；同

4、端粒長度短的人相比，端粒長度較長的人肝癌發(fā)病風險顯著升高，以健康人群為對照時，OR(odd ratio)值是7.28、95％CI(confidence interval)為4.46-11.8，以慢性肝疾病人群為對照時，OR值是2.86，95％CI為1.74-4.70；平均端粒長度越長肝癌發(fā)病風險越高，呈現(xiàn)劑量依賴的關系(P for trend<0.001 in both controls)。此外，外周血和正常肝組織的端粒長度相關性為0.

5、78(P<0.001)，外周血和肝硬化組織的端粒長度相關性達0.67(P=0.001)。進一步分析發(fā)現(xiàn)，在預測肝癌發(fā)病風險上端粒長度和吸煙或飲酒具有聯(lián)合效應?？傊?，本實驗首次采用流行病學的研究方法證明外周血的平均端粒長度越長與肝癌發(fā)病風險升高顯著相關。
　　第二部分：染色體端粒長度與肝癌預后關系的研究
　　本實驗收集228例肝癌患者的外周血樣本并提取基因組DNA，并對這些肝癌患者進行常規(guī)隨訪調(diào)查和流行病學資料的收集，利用實時

6、定量PCR的方法檢測肝癌患者的平均端粒長度。其中，20例患者因失訪或臨床資料不全被去除，6例患者因DNA質(zhì)量不佳被去除，最后分析了202例患者的隨訪資料和外周血平均端粒長度的關系。多變量COX回歸分析表明：外周血的平均端粒長度越長的患者其預后越差[HR(Hazard Ratio)95％CI:2.18(0.78-1.49);P<0.001]；此外，外周血端粒長度、Child-Pugh評分、腫瘤大小、門靜脈癌栓、以及血清甲胎蛋白(alpha

7、-fetoprotein,AFP)水平均是影響肝癌總體生存率的獨立危險因子。分層分析發(fā)現(xiàn)：外周血的平均端粒長度越長的肝癌患者其預后越差，尤其在嚴重的肝癌患者中(如伴有肝硬化、腫瘤大、腫瘤數(shù)目多、AFP水平高、TNM分期Ⅲ和Ⅳ的患者)；Kaplan-Meier分析亦表明端粒長度較長的人群生存時間顯著短于端粒長度較短的人群(P=0.002)，尤其在嚴重的肝癌患者中。總之，本實驗首次表明外周血的平均端粒長度越長的肝癌患者預后越差，可作為肝癌預