大白菜端粒相關(guān)序列的克隆及不同染色體FISH標(biāo)記的建立.pdf

1、分類號：曼魚三壘密級：公玨單位代碼：學(xué)號：100862009328大白菜端粒相關(guān)序列的克隆及不同染色體FISH標(biāo)記的建立CloningofTelomereAssociatedSequenceandEstablishmentofChromosomeSpecificFISHMarkersinChineseCabbage學(xué)位申請人：李九歡指導(dǎo)教師：申書興教授軒淑欣副研究員學(xué)科專業(yè)：蔬菜學(xué)學(xué)位類別：農(nóng)學(xué)碩士授予單位：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)答辯日期：二O一

2、二年六月二日摘要IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIY2143683重復(fù)序列是真核生物基因組的一個重要組成部分，不僅對維持染色體的空間結(jié)構(gòu)、基因的表達(dá)調(diào)控、遺傳重組等都具有重要作用，而且串聯(lián)重復(fù)的DNA簇往往具有種屬甚至染色體的特異性。因此，克隆和分析重復(fù)序列是研究一個真核生物基因組的有效手段。大白菜(BrassicacampestrisLssppekinensis)是十字花科蕓薹屬(BrasJic以)中最重要的蔬菜作物之一，屬

3、二倍體物種。此外，大白菜為小染色體物種，且非同源染色體形態(tài)相似。建立有效的染色體識別方法是進(jìn)行核型分析和細(xì)胞遺傳學(xué)研究的重要前提。但目前為止，利用有絲分裂中期染色體，基于rDNA為探針的FISH核型分析，可把大白菜10條染色體中的6條準(zhǔn)確區(qū)分出，但仍有4條染色體難以識別?；诖?，本研究以擬南芥重復(fù)序列為引物，以大白菜自交系‘85一l’基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，對大白菜端粒相關(guān)序列進(jìn)行了克隆和測序分析；并以錨定大白菜不同染色體的B

4、AC克隆為探針，在大白菜中期染色體進(jìn)行FISH，結(jié)合45SrDNA、5SrDNA及著絲粒重復(fù)探針的FISH結(jié)果，構(gòu)建了精確識別大白菜不同染色體的FISH標(biāo)記核型圖。主要研究結(jié)果如下：1以擬南芥的端粒重復(fù)序列(TTTAGGG)3為引物，在大白菜中擴(kuò)增并克隆了一個344bp的DNA片段。序列分析和比對表明，該序列為端粒相關(guān)序列(TAS)，位于大白菜2號染色體的近末端，該序列不僅含有擬南芥類型端粒重復(fù)單元，還含有其他生物的端粒重復(fù)單元。25S

5、rDNA探針在大白菜染色體上共檢測到了10個雜交信號，分別位于1—3號、5號染色體長臂的近著絲點(diǎn)區(qū)域和10號染色體的短臂術(shù)端；45SrDNA探針在大白菜染色體上同樣檢測到了10個雜交信號，但所位于的染色體及部位有所不同，分別位于1～5號染色體長臂近著絲點(diǎn)區(qū)域。3大白菜CentBrl著絲粒重復(fù)探針在大白菜中期染色體上共檢測到了16個雜交信號，分別位于1號、3號、4號、6～10號染色體的著絲點(diǎn)區(qū)域；CentBr2著絲粒重復(fù)探針探針在大白菜1

6、0對染色體上共檢測到了4個雜交信號，分別位于第2對染色體長臂近著絲點(diǎn)處和第5對染色體長臂的術(shù)端。4除A1連鎖群外，其他9個連鎖群篩出的BAC克隆分別在大白菜9對同源染色體上各出現(xiàn)了1對雜交信號，確定了大白菜染色體和連鎖群的對應(yīng)關(guān)系，其中A2～A10連鎖群分別對應(yīng)于染色體6號、2號、9號、5號、4號、7號、8號、1號和10號，建立了一個基于rDNA、CentBrl、CentBr2和染色體特異BAC克隆FISH標(biāo)汜的染色體核型模式圖。關(guān)鍵詞