慢性低氧高二氧化碳大鼠骨骼肌自噬的改變及其機(jī)制探討.pdf

1、目的：
　　本實驗通過調(diào)節(jié)氧艙內(nèi)的氧濃度及二氧化碳濃度建立慢性低氧高二氧化碳大鼠模型，模擬人類慢性阻塞性肺疾病(COPD)的病理生理特點(diǎn)。通過HE染色觀察骨骼肌形態(tài)，Western-Blot法檢測骨骼肌HIF-1α、BNIP3、Beclin1、LC3蛋白表達(dá)量，Real-Time RCR法檢測HIF-1αmRNA、BNIP3 mRNA、Beclin1 mRNA的含量。本實驗意在觀測慢性低氧高二氧化碳條件對自噬的影響，并探討其可能機(jī)

2、制。
　　方法：
　　本實驗采用慢性低氧高二氧化碳的動物模型，將32只6周齡SPF級雄性SD大鼠，體重180～220g，通過隨機(jī)數(shù)字表分成2組，分別為常氧對照組(normalcontrol group，NC組，n=16)、低氧高二氧化碳造模組(intermittenthypoxia/hypercapnia，HH組，n=16)。造模組大鼠置于常壓低氧高二氧化碳艙內(nèi)（通過氮?dú)饩S持氧濃度9～11％，輸入CO2使艙內(nèi)二氧化碳濃度保持

3、5～6％），每天8小時，每周6天，持續(xù)2周，其余時間與對照組在同一室內(nèi)（室溫20～23℃，相對濕度50％～70％）;對照組生活在正常大氣環(huán)境中，其他飼養(yǎng)條件兩組相同。在造模前后分別測量大鼠體重。造模完成后，大鼠用10％水合氯醛腹腔注射麻醉后，打開胸腔，經(jīng)左心室生理鹽水灌注，完整取出右側(cè)股四頭肌，取材后立即保存于液氮中。每組取4只大鼠股四頭肌，4％多聚甲醛固定，做常規(guī)石蠟包埋。全部過程迅速完成。用蘇木精—伊紅染色法（HE染色）觀察骨骼肌肌

4、纖維的形態(tài)改變;Western blot技術(shù)分別檢測兩組大鼠骨骼肌HIF-1α、Beclin1、BNIP3、LC3的蛋白表達(dá);實時熒光定量PCR技術(shù)測定兩組大鼠HIF-1αmRNA、BNIP3mRNA、Beclin1 mRNA的含量。
　　結(jié)果：
　　1、大鼠體重
　　造模前，對照組與實驗組大鼠體重?zé)o統(tǒng)計學(xué)差異;造模2周后，造模組和對照組體重均較前增加，與對照組相比，實驗組體重明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）

5、;
　　2、骨骼肌形態(tài)
　　對照組大鼠鼠骨骼肌肌纖維形態(tài)正常，規(guī)則;實驗組大鼠骨骼肌肌纖維排列紊亂、斷裂，局部有萎縮、變細(xì)，脂肪沉積;
　　3、HIF-1α、BNIP3、Beclin1、LC3蛋白表達(dá)量
　　與對照組相比，造模組HIF-1α、BNIP3、Beclin1、LC3蛋白表達(dá)量增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;
　　4、HIF-1α mRNA、BNIP3 mRNA、Beclin1 mRNA