小鼠牙胚在腎包膜及口腔頰黏膜下成牙能力的對比研究.pdf

1、背景及目的：
　　近年來,牙齒組織工程以及基于牙齒發(fā)育和干細胞理論的牙齒再生技術(shù),逐漸成為口腔醫(yī)學(xué)的研究熱點,同時,建立一種合適的器官培養(yǎng)模式也是該領(lǐng)域的重點問題。本實驗旨在對比分析腎包膜和口腔黏膜環(huán)境對小鼠牙胚成牙的適宜度,為牙齒再生技術(shù)探尋較為理想的培養(yǎng)環(huán)境。
　　方法：
　　選擇健康成年ICR小鼠50只,其中雌鼠30只,雄鼠20只,體重約20 g。本實驗共分為2組:1.實驗組:實驗組A-腎包膜下移植(選取右腎作為

2、移植部位,挑開腎囊膜后隨機選取牙胚植入),共3只小鼠,每只鼠移植12個牙胚,共36個牙胚;實驗組 B-口腔黏膜下移植(分別于小鼠的左右側(cè)下頜切牙旁頰黏膜處作切口,隨機選取牙胚植入),共18只小鼠,每只鼠移植2個牙胚,共36個牙胚;2.正常對照組:實驗組C-取1～2只懷孕14.5天的孕鼠,不做任何處理,讓其自然生產(chǎn)。于術(shù)后3周、4周、8周三個時間點處死實驗動物后獲取標(biāo)本,進行大體標(biāo)本觀察、制作組織切片、HE染色、硬度測試、拉曼光譜分析等。

3、
　　結(jié)果：
　　所有動物術(shù)后均存活良好,腎包膜及口腔黏膜下均能檢測到移植物。牙胚在腎包膜及口腔黏膜下的發(fā)育情況如下所述。
　　1.大體形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果顯示:腎包膜下組牙冠形態(tài)與同時期正常鼠磨牙形態(tài)相一致,尖窩發(fā)育明顯;而口腔黏膜下組在各時間點牙冠體積均小于腎包膜下組,且牙齒尖窩發(fā)育狀態(tài)不如腎包膜下組明顯。在兩個實驗組中均無牙根生成。
　　2.組織學(xué)染色結(jié)果顯示:各組HE染色均可見正常的牙體組織結(jié)構(gòu),在兩個實驗組中

4、可見上皮根鞘的組織結(jié)構(gòu)但未進一步延伸;和腎包膜下組3～4周相比,在黏膜下形成的牙釉質(zhì)層和牙本質(zhì)層較薄,成釉細胞及成牙本質(zhì)細胞分化不明顯;兩個實驗組8周時,均出現(xiàn)成釉細胞及成牙本質(zhì)細胞退化,牙髓內(nèi)細胞減少,部分形成機化組織,呈現(xiàn)纖維組織交織成網(wǎng)狀。
　　3.成牙概率統(tǒng)計結(jié)果顯示:同一移植時間點比較,腎包膜下組移植的成牙率均高于口腔黏膜下移植組,而在同一組內(nèi),隨著移植周期的增長,成牙率有所下降。
　　4.移植物硬度和彈性模量結(jié)果

5、顯示:在釉質(zhì)的硬度比較上,僅口腔黏膜4周組的釉質(zhì)硬度比成年鼠牙低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),而其他組間兩兩比較的差別均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。在釉質(zhì)的彈性模量比較上,腎包膜下3周后的移植物釉質(zhì)彈性模量比成年鼠牙略低,但差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);腎包膜下4周和口腔黏膜下4周后的移植物釉質(zhì)彈性模量均低于成年鼠牙組和腎包膜3周的釉質(zhì)彈性模量,差異具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),但是這兩組之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P

6、>0.05)。各組間牙本質(zhì)的硬度及彈性模量無顯著性差異(P>0.05)。
　　5.拉曼光譜分析結(jié)果顯示:各組的拉曼光譜趨勢基本一致,在961 cm-1處有最大峰值,但是在2947 cm-1處,口腔黏膜3周組有明顯的峰值,遠高于其他各組。
　　結(jié)論：
　　1.對于ED14.5的牙胚來說,相對口腔黏膜環(huán)境而言,腎包膜下環(huán)境培育3～4周更能發(fā)育成相對完整的牙齒。
　　2.口腔黏膜環(huán)境所形成牙齒的諸多性狀與腎包膜環(huán)境下發(fā)