運用第二代測序技術對母體血漿中胎兒游離DNA進行β地中海貧血無創(chuàng)性產前診斷的應用性研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學2 0 1 1 級博士學位論文運用第二代測序技術對母體血漿中胎兒游離D N A進行D 地中海貧血無創(chuàng)性產前診斷的應用性研究D e v e l o p m e n to f a N o n - I n v a s i v e P r e n a t a l D i a g n o s t i cT e s tf o rB e t a - - T h a l a s s a e m i aU s i n g C e l l &#

2、183;·f r e eF e t a l D N A課題來源： 白選專 業(yè) 名 稱學位申請人指 導 教 師答辯委員會主席答辯委員會成員論文評閱人婦產科學熊麗鐘梅教授張建平教授陳敦金教授肖小敏教授余艷紅教授張鎮(zhèn)海教授2 0 1 4 年5 月8 日 廣州中文摘要中海貧血基因攜帶者的孕婦進行地貧基因產前診斷( p r e n a t a l d i a g n o s i s ) ，可有效預防地貧患兒的出生。產前診斷是現(xiàn)代遺傳病診

3、斷的重點，也是臨床產科學的重要組成部分，是通過物理、生化和遺傳等診斷技術和方法，對胎兒的遺傳狀況進行診斷，其主要目的在于為遺傳病風險家庭提供充足可靠的信息，使他們在妊娠期做出適當?shù)倪x擇。侵入性方法是獲取胎兒物質最直接的方法，是目前產前診斷廣泛使用的方法之一，主要通過羊膜腔穿刺術、絨毛取樣術、臍靜脈血取樣術等方式獲取到充足的胎兒物質用于遺傳學檢測，但存在流產( O ．2 ％一3 ％) ，絨毛膜炎，羊水滲漏，穿刺部位出血、感染，胎兒心動過緩

4、，胎膜早破等手術并發(fā)癥，增加孕婦風險同時加重孕婦及家屬焦慮情緒。因此大力發(fā)展無創(chuàng)性產前診斷技術是臨床醫(yī)務工作者和科學研究者共同努力的方向。從2 0 0 7 年發(fā)現(xiàn)母體血漿中存在胎兒游離D N A 至今，B 地中海貧血作為常染色體隱性遺傳性疾病的常見病之一被學者做為單基因疾病模型進行無創(chuàng)性產前診斷的方法學研究。最初采用飛行質譜、A S - P C R 等方法針對父母攜帶不同突變的胎兒進行父源性突變等位基因排除性診斷，但該方法存在局限性：(

5、 1 ) 不能對攜帶了父源性突變等位基因的胎兒行進一步的診斷。( 2 ) 不能針對雙親攜帶相同突變的胎兒進行診斷。隨著數(shù)字化P C R 、液滴數(shù)字化P C R 以及第二代測序等絕對定量技術的出現(xiàn)，及相對突變劑量( R M D ) 這一理論的提出，推進了單基因疾病的無創(chuàng)性產前診斷的發(fā)展，使得從c f D N A 中鑒別胎兒是否遺傳了母源性突變位點成為現(xiàn)實。目前研究利用S N P 的特點，通過父母具有不同信息的S N P s 位點進行R M