基于mGluRs探討補(bǔ)腎活血法對(duì)AGEs及缺氧條件下視網(wǎng)膜神經(jīng)興奮性毒性損傷的干預(yù)機(jī)制.pdf

1、成都中醫(yī)藥大學(xué)（臨床醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院）二0一四屆博一四屆博士研究生士研究生學(xué)位學(xué)位論文論文基于基于mGluRs探討補(bǔ)腎活血法對(duì)探討補(bǔ)腎活血法對(duì)AGEs及缺氧條件下及缺氧條件下視網(wǎng)膜神經(jīng)興奮性毒性損傷的干預(yù)機(jī)視網(wǎng)膜神經(jīng)興奮性毒性損傷的干預(yù)機(jī)制EffectofBushenhuoxueserumonhypoxiaAGEsinducedretinalexcitotoxictybasedonalteringmGluRsexpression學(xué)科專業(yè)

2、：中醫(yī)五官科學(xué)學(xué)科專業(yè)：中醫(yī)五官科學(xué)研究生學(xué)號(hào)：研究生學(xué)號(hào)：2011B039二○一四○一四年四月年四月成都中醫(yī)藥大學(xué)博士學(xué)位論文3中文摘要文摘要背景背景糖尿病視網(wǎng)膜病變（diabeticretinopathyDR）中存在谷氨酸（glutamate，Glu）興奮性神經(jīng)毒性損害，Glu既可作用于離子型Glu受體（ionotropicglutamatereceptsiGluRs）也可作用于代謝型Glu受體（metabotropicglutam

3、atereceptsmGluRs）而發(fā)揮興奮性神經(jīng)毒性作用。其中，mGluRs的表達(dá)異常在其中可能起著重要的作用，但至今未見(jiàn)中醫(yī)藥對(duì)DR病理過(guò)程中視網(wǎng)膜Mller細(xì)胞和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retinalganglioncellsRGCs)的mGluRs表達(dá)有何影響的報(bào)道。目的目的從mGluRs角度探討補(bǔ)腎活血法對(duì)糖基化終末產(chǎn)物（advancedglycationendproductsAGEs）及缺氧條件下視網(wǎng)膜神經(jīng)興奮性毒性損傷的干預(yù)機(jī)制。方法

4、方法采用中藥血清學(xué)方法制備補(bǔ)腎活血中藥含藥血清。分別以改良消化方法純化培養(yǎng)SD乳鼠視網(wǎng)膜Mller細(xì)胞并傳代至第2代、兩步法純化培養(yǎng)SD乳鼠RGCs，然后將RGCs種入第2代Mller細(xì)胞生長(zhǎng)的25cm2培養(yǎng)瓶中，二者比例大約為1:25，共培養(yǎng)5d后，將12個(gè)培養(yǎng)瓶隨機(jī)分為正常對(duì)照組（20%正常SD大鼠血清培養(yǎng)）、正常中藥干預(yù)組（20%SD大鼠含藥血清培養(yǎng)）、低AGEs組（終濃度50mgL的糖基化終末產(chǎn)物）、低AGEs中藥血清干預(yù)組（終

5、濃度50mgL的糖基化終末產(chǎn)物20%SD大鼠含藥血清干預(yù)）、高AGEs組（終濃度100mgL的糖基化終末產(chǎn)物培養(yǎng)）、高AGEs中藥血清干預(yù)組（終濃度100mgL的糖基化終末產(chǎn)物20%SD大鼠含藥血清干預(yù)）、低缺氧組（終濃度1.0mmolL連二亞硫酸鈉培養(yǎng)）、低缺氧中藥血清干預(yù)組（終濃度1.0mmolL連二亞硫酸鈉20%SD大鼠含藥血清干預(yù)）、高缺氧組（終濃度2.0mmolL的連二亞硫酸鈉培養(yǎng)）、高缺氧中藥血清干預(yù)組（終濃度2.0mmol

6、L的連二亞硫酸鈉20%SD大鼠含藥血清干預(yù)）、高AGEs低缺氧組（終濃度100mgL的糖基化終末產(chǎn)物終濃度1.0mmolL的連二亞硫酸鈉）、高AGEs低缺氧中藥血清干預(yù)組（終濃度100mgL的糖基化終末產(chǎn)物終濃度1.0mmolL的連二亞硫酸鈉20%SD大鼠含藥血清干預(yù)）。采用Westernblot蛋白印跡法檢測(cè)各組mGluRs亞型以及Homer的蛋白水平表達(dá)水平，以酶聯(lián)免疫吸附法(enzymelinkedimmunosbentassay