替普瑞酮大鼠視網(wǎng)膜興奮性損傷模型HSF1表達(dá)的影響.pdf

1、目的:通過(guò)向大鼠玻璃體腔注射N(xiāo)-甲基-D-天冬氨酸（N-Methyl-D-aspartic acid，NMDA）制作視網(wǎng)膜興奮性損傷模型，觀(guān)察替普瑞酮(geranylgeranylacetone，GGA)對(duì)熱休克轉(zhuǎn)錄因子1(heatshock transcription factor1，HSF1)表達(dá)的影響，從而進(jìn)一步明確GGA誘導(dǎo)熱休克蛋白70(heat shock protein70，HSP70)表達(dá)的機(jī)制。
　　方法:將48

2、只健康清潔級(jí)Wistar大鼠隨機(jī)平均分為4組:分別為正常對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)對(duì)照A組、實(shí)驗(yàn)對(duì)照B組以及實(shí)驗(yàn)組。正常對(duì)照組不行任何處理;實(shí)驗(yàn)組腹腔內(nèi)注射GGA(800mg/Kg)，實(shí)驗(yàn)對(duì)照A組、實(shí)驗(yàn)對(duì)照B組腹腔注射等量溶劑(10％DMSO)。腹腔注射后1h實(shí)驗(yàn)對(duì)照B組和實(shí)驗(yàn)組的每只大鼠隨機(jī)抽取一只眼，將2μ l NMDA(80mmol/L)注入玻璃體腔內(nèi)，做好標(biāo)記;實(shí)驗(yàn)對(duì)照A組隨機(jī)取一只眼行玻璃體腔穿刺并注射等量PBS。實(shí)驗(yàn)組及實(shí)驗(yàn)對(duì)照組于玻璃體

3、腔穿刺后2h處死大鼠，正常對(duì)照組于實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后1h全部處死。HE染色觀(guān)察視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)變化，采用RT-PCR分析視網(wǎng)膜中HSF1mRNA的表達(dá)，免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)P-HSF1-Ser326蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:HE染色顯示:正常對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜組織層次完整清晰，細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，染色均勻;實(shí)驗(yàn)對(duì)照A組與正常組相比，視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)目及形態(tài)無(wú)明顯差別;實(shí)驗(yàn)對(duì)照B組大鼠較正常組大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層水腫，視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞胞漿內(nèi)出

4、現(xiàn)空泡樣變性，內(nèi)核層、外核層排列疏松，但視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)目及視網(wǎng)膜厚度未見(jiàn)明顯變化;實(shí)驗(yàn)組大鼠視網(wǎng)膜損傷較實(shí)驗(yàn)對(duì)照B組明顯減輕。RT-PCR結(jié)果顯示:實(shí)驗(yàn)對(duì)照A組較正常對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜中HSF1mRNA的表達(dá)無(wú)明顯差別;實(shí)驗(yàn)對(duì)照B組HSF1mRNA的表達(dá)量較前兩組明顯增加;實(shí)驗(yàn)組較正常對(duì)照組mRNA表達(dá)量增加，較實(shí)驗(yàn)對(duì)照B組無(wú)明顯差別。免疫組織化學(xué)染色顯示:正常對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)對(duì)照A組視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)核層及光感受器細(xì)胞層的內(nèi)節(jié)只見(jiàn)微量的棕黃