TNF-α、IL-1β通過PKA-CREB信號通路誘導(dǎo)成纖維樣滑膜細胞中力生長因子表達.pdf

1、力效應(yīng)細胞是指能對力刺激產(chǎn)生響應(yīng)的細胞，包括骨骼肌細胞、平滑肌細胞、心肌細胞、成纖維細胞、成骨細胞、內(nèi)皮細胞等。力效應(yīng)細胞在受到力刺激時表達IGF-1基因的剪接變異體IGF-1Ec，在人體中稱為力生長因子（Mechano growth factor，MGF）。該因子具有多種生物學(xué)功能。它能激活肌肉衛(wèi)星細胞，抑制其分化，促進肌肉肥大，修復(fù)肌損傷；也能保持心肌梗塞后心肌的收縮功能，起到心臟保護作用，同時還能有效促進運動神經(jīng)元撕裂和擠壓損傷的

2、恢復(fù)。MGF的這些生物學(xué)功能在組織修復(fù)領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。組織、器官損傷后，通常伴隨著炎癥響應(yīng)。炎性因子TNF-α、IL-1β提高成纖維樣細胞中第二信使cAMP的表達水平，而第二信使對MGF的表達有促進作用。因而，炎癥響應(yīng)與MGF的表達調(diào)控是否存在聯(lián)系是值得我們探討的問題。本課題主要研究工作和結(jié)果如下：
　?、偈褂媒M織塊培養(yǎng)法提取人成纖維樣滑膜細胞，并對原代提取的細胞進行H&E染色和成纖維樣細胞標(biāo)記Vimentin的免疫組化鑒

3、定。建立后續(xù)實驗所需的細胞庫。
　?、谶\用定量PCR方法檢測正常成纖維樣滑膜細胞（FLSs）和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎滑膜細胞（RA-FLSs）中MGF的表達水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)RA-FLSs細胞中MGF的平均水平較FLSs中高，但兩組表達量沒有統(tǒng)計差異。
　?、鄯謩e用炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6刺激FLSs，檢測MGF mRNA的表達量。實驗發(fā)現(xiàn)TNF-α、IL-1β能顯著誘導(dǎo)MGF表達的提高。IL-6對MGF表達無影響。

4、r>　?、芤訮KA信號通路特異性抑制劑KT5720預(yù)處理FLSs，隨后用TNF-α、IL-1β刺激細胞，收集細胞總RAN和總蛋白，檢測MGF mRNA表達量，以及PKA信號通路下游轉(zhuǎn)錄因子CREB及其Ser133位磷酸化p-CREB蛋白的表達差異。研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α、IL-1β誘導(dǎo)的MGF表達是通過PKA/CREB信號通路實現(xiàn)的。
　　綜上所述，我們認為TNF-α、IL-1β通過PKA/CREB信號通路誘導(dǎo)人FLSs細胞中MGF