TNF-α與IL-1對骨結(jié)核破骨細胞誘導機制的研究.pdf

1、目的：探討熱處理結(jié)核桿菌凍干物與超聲裂解結(jié)核桿菌凍干物能否誘導小鼠骨髓單核細胞分化形成破骨細胞及熱處理結(jié)核桿菌凍干物與超聲裂解結(jié)核桿菌凍干物刺激小鼠骨髓單核細胞分泌的腫瘤壞死因子α（Tumor Necrosis Factorα，TNF-α）和白細胞介素-1（Interleukin-1，IL-1）濃度與小鼠破骨細胞分化形成的相關性及其機制。
　　方法：建立體外破骨細胞培養(yǎng)體系，觀察采用不同濃度（0.2μg/ml，2μg/ml，20μ

2、g/ml，200μg/ml）的熱處理結(jié)核分枝桿菌凍干物和超聲裂解結(jié)核分枝桿菌凍干物于對體外誘導小鼠骨髓單核細胞分化形成破骨細胞的影響,采用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP)染色和骨陷窩吸收實驗來鑒定破骨細胞及其噬骨能力。收集誘導24h和48h后的細胞培養(yǎng)液，ELISA定量檢測細胞培養(yǎng)液中TNF-α、IL-1濃度。
　　結(jié)果：誘導24h、48h后，細胞培養(yǎng)液中TNF

3、-α、IL-1濃度測定顯示熱處理結(jié)核分枝桿菌凍干物組中實驗組與空白組對比無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。超聲裂解結(jié)核分枝桿菌凍干物組中低濃度（0.2μg/ml）組TNF-α、IL-1濃度與空白組對比無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。其余各濃度組TNF-α、IL-1濃度均高于空白組（P＜0.05），且隨著超聲裂解結(jié)核分枝桿菌凍干物濃度增加，細胞培養(yǎng)液中TNF-α、IL-1濃度也逐漸增加，各濃度組TNF-α、IL-1濃度差均值有統(tǒng)計學意義（P＜0

4、.05）。誘導7天TRAP染色示：不同濃度的熱處理結(jié)核分枝桿菌凍干物組中均有少量TRAP染色陽性細胞形成，與空白組比較無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。超聲裂解結(jié)核分枝桿菌凍干物組中均有TRAP染色陽性細胞形成，低濃度超聲裂解結(jié)核分枝桿菌凍干物組（0.2μg/ml）與空白組比較無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。2μg/ml、20μg/ml組與空白組比較均有統(tǒng)計學差異（P＜0.05），200μg/ml組在接種培養(yǎng)3天后，培養(yǎng)液中出現(xiàn)大量漂浮死亡細

5、胞，鏡下觀察細胞形態(tài)及結(jié)構(gòu)模糊、裂解。骨陷窩吸收實驗顯示：熱處理結(jié)核桿菌凍干物組與空白組比較均無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。低濃度超聲裂解結(jié)核桿菌凍干物組（0.2μg/ml、200μg/ml）與空白組相比無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。余各濃度超聲裂解結(jié)核桿菌組與空白組比較均有統(tǒng)計學差異（P＞0.05），且隨超聲裂解結(jié)核桿菌凍干物濃度增加，骨陷窩計數(shù)逐漸增大。200μg/ml組骨陷窩計數(shù)與20μg/ml組相比較骨陷窩計數(shù)明顯減少。