2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  通過細(xì)胞學(xué)實驗,觀察晚期糖基化終末產(chǎn)物(advanced glycationend products,AGEs)對人軟骨細(xì)胞TNF-α、MMP-13、IL-1表達(dá)以及NF-κB活性水平的影響,以及過氧化物酶體增殖物激活受體γ(Peroxisome proliferator-activated receptor,PPARγ)特異性激動劑匹格列酮對上述反應(yīng)的抑制作用,為匹格列酮這一2型糖尿病治療藥物用于骨關(guān)節(jié)炎(osteo

2、arthritis,OA)治療提供實驗與理論依據(jù)。
  方法:
  運(yùn)用機(jī)械分離與兩步酶順序消化法分離培養(yǎng)人軟骨細(xì)胞,并用Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色以及細(xì)胞免疫熒光對人軟骨細(xì)胞進(jìn)行鑒定。在體外分離培養(yǎng)的人軟骨上:
  (1)不同濃度AGEs(1-100μg/ml)干預(yù)人軟骨細(xì)胞24h后采用Real-time PCR及Western blot檢測TNF-α、MMP-13、IL-1三者的mRNA及蛋白表達(dá)水平,采用Weste

3、rnblot檢測人軟骨細(xì)胞胞漿中IKBα及胞核中NF-κB p65的含量;
  (2)不同濃度(1-100μg/ml)AGEs及不同處理時間(3、6、12、24h)干預(yù)人軟骨細(xì)胞后,檢測PPARγ的表達(dá)水平;
  (3)預(yù)先加入不同濃度匹格列酮(1-50μM)與軟骨共同孵育2h,再加入100μg AGEs處理24h,檢測PPARγ、TNF-α、MMP-13與IL-1β的mRNA及蛋白表達(dá)水平,同時應(yīng)用Western blot

4、檢測人軟骨細(xì)胞胞漿中IKBα及胞核中NF-κB p65的含量。
  結(jié)果:
  (1)通過機(jī)械分離與兩步酶順序消化法獲得了數(shù)量多、純度高的人軟骨細(xì)胞;
  (2)與對照組比較,AGEs可濃度依賴性地誘導(dǎo)人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞TNF-α、MMP-13、IL-1α、IL-1β表達(dá)增多,且以100μg/ml組作用最明顯;
  (3)與對照組比較,AGEs處理組中軟骨細(xì)胞胞漿中IKBα含量明顯減少、而胞核中NF-κB p65的含

5、量明顯增多,且其作用隨著AGEs濃度增高而增加,以100μg/ml組作用最顯著;
  (4)AGEs干預(yù)組中軟骨細(xì)胞PPARγ表達(dá)水平明顯低于正常對照和BSA對照組比較,且隨著AGEs濃度增加以及作用時間延長,軟骨細(xì)胞PPARγ表達(dá)水平越低;(5)預(yù)先加入匹格列酮后再加入AGEs處理軟骨細(xì)胞發(fā)現(xiàn),軟骨細(xì)胞中TNF-α、IL-1、MMP-13水平顯著低于單獨(dú)AGEs處理組;
  (5)匹格列酮+100μg/ml AGEs處理組

6、中,軟骨細(xì)胞核NF-κBp65含量明顯高于單獨(dú)AGEs處理組,而胞漿中IKBα含量顯著低于單獨(dú)AGEs處理組。
  結(jié)論:
  (1)AGEs可促進(jìn)NF-κB活化,誘導(dǎo)IL-1、MMP-13和TNF-α表達(dá)增多;
  (2)AGEs能誘導(dǎo)人軟骨細(xì)胞PPARγ下調(diào);
  (3)PPARγ特異性激動劑匹格列酮能夠通過降低NF-κB活化水平,對AGEs誘導(dǎo)人軟骨細(xì)胞IL-1、MMP-13和TNF-α表達(dá)增多的反應(yīng)起到抑

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