HDAC經(jīng)MAPK通路調(diào)節(jié)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞IL-1β誘導(dǎo)的ADAMTS-5表達(dá).pdf

1、目的：
　　研究IL-1β引起的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞ADAMTS-5上調(diào)的現(xiàn)象和作用機(jī)制，以及在此病理過(guò)程中HDAC對(duì)其調(diào)控機(jī)制。
　　方法：
　　使用濃度梯度的IL-1β刺激大鼠軟骨細(xì)胞24h，用PCR檢測(cè)ADAMTS-5的表達(dá)，CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖毒性的影響。再用10ng/mL的IL-1β刺激大鼠軟骨細(xì)胞，用WB和PCR檢測(cè)時(shí)間依賴的ADAMTS-5和MAPK相關(guān)信號(hào)分子的表達(dá)規(guī)律，并以相應(yīng)的信號(hào)通路激動(dòng)劑和抑制劑加以驗(yàn)證

2、。IL-1β處理軟骨細(xì)胞后，以PCR檢測(cè)軟骨細(xì)胞的HDAC各亞型變化，并使用TSA和PCI-34051兩種HDAC抑制劑研究它們對(duì)經(jīng)IL-1β刺激的軟骨細(xì)胞的影響。在這它們預(yù)處理軟骨細(xì)胞后再使用IL-1β刺激細(xì)胞，以研究上述影響的作用機(jī)制。另外再用對(duì)應(yīng)的siRNA驗(yàn)證上述抑制劑的效應(yīng)及機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　與對(duì)照組相比，IL-1β刺激可引起軟骨細(xì)胞ADAMTS-5表達(dá)增高，在此過(guò)程中可以觀察到ADAMTS-5的上升具有時(shí)間

3、依賴性，同時(shí)伴有ERK及JNK分子的磷酸化。相應(yīng)的ERK和JNK的激動(dòng)劑或者抑制劑可以模擬或者阻斷IL-1β刺激結(jié)果。IL-1β刺激后，HDAC4和HDAC8表達(dá)增加。TSA和PCI-34051則可以阻斷IL-1β的刺激結(jié)果，經(jīng)它們預(yù)處理后的細(xì)胞再經(jīng)IL-1β刺激時(shí)ERK和JNK磷酸化較未處理組有不同程度的減弱。對(duì)應(yīng)的 siRNA處理結(jié)果與上述抑制劑預(yù)處理結(jié)果類似。
　　結(jié)論：
　　IL-1β可上調(diào)HDAC4和HDAC8，進(jìn)