骨痹康方對IL-1α誘導(dǎo)的人軟骨細胞Ⅱ型膠原mRNA表達及WOMAC骨關(guān)節(jié)炎指數(shù)的影響研究.pdf

1、目的：探討中醫(yī)學(xué)對“骨痹”發(fā)病機理的認(rèn)識，揭示驗方“骨痹康”方對IL-1α誘導(dǎo)的人關(guān)節(jié)軟骨細胞損傷模型Ⅱ型膠原mRNA表達的調(diào)控機制和對軟骨細胞的保護機制；通過隨機對照臨床試驗評價“骨痹康”方治療膝OA的有效性和安全性，為其防治骨關(guān)節(jié)炎提供可靠的理論依據(jù)、實驗數(shù)據(jù)和臨床循證證據(jù)。 方法：1理論研究方法：采用文獻學(xué)、邏輯推理、比類取象等方法，對OA發(fā)病機理的中醫(yī)學(xué)認(rèn)識進行探討。2 實驗方法：(1)取材手術(shù)后人關(guān)節(jié)軟骨，培養(yǎng)軟骨細

2、胞；(2)MTT比色法觀察骨痹康對正常和IL-1α誘導(dǎo)的軟骨細胞增殖的影響； (3)RT-PCR法觀察骨痹康對IL-1α誘導(dǎo)的軟骨細胞Ⅱ型膠原mRNA表達的影響；(4)免疫組織化學(xué)法觀察骨痹康對IL-1α誘導(dǎo)的軟骨細胞Ⅱ型膠原表達的影響。3 臨床研究方法：采用隨機平行對照的試驗方法，入選病例隨機分為試驗組和對照組。試驗組給予骨痹康水煎劑每日一劑，對照組給予維骨力2粒，每日3次，療程4周。治療前后兩組分別評價其WOMAC指數(shù)、中醫(yī)證候

3、改善情況、關(guān)節(jié)壓痛改善情況、關(guān)節(jié)腫脹改善情況、關(guān)節(jié)活動度的改善情況、起效時間、合用泰諾林的粒數(shù)和時間、不良反應(yīng)、實驗室安全指標(biāo)的檢測情況。 結(jié)果：1 理論研究結(jié)果：根據(jù)導(dǎo)師張前德教授的學(xué)術(shù)思想，骨關(guān)節(jié)炎根本病機為“腎虛絡(luò)痹”即肝腎虧虛、痰瘀阻絡(luò)，病變部位在關(guān)節(jié)絡(luò)脈，不外絡(luò)虛、絡(luò)實，絡(luò)虛是肝腎不足、氣血虧虛、絡(luò)脈失養(yǎng)；絡(luò)實是痰瘀互結(jié)、邪滯絡(luò)脈。其中絡(luò)虛為始動因素，絡(luò)脈瘀滯為其病變形成的最終病理基礎(chǔ)。臨床治療骨關(guān)節(jié)炎應(yīng)考慮其臨床癥

4、狀和發(fā)病特點，在辨證的基礎(chǔ)上，注重“補腎通絡(luò)”。2 實驗研究結(jié)果：(1)成功培養(yǎng)取材于6例患者關(guān)節(jié)術(shù)后軟骨的軟骨細胞；(2)MTT比色法觀察骨痹康對軟骨細胞增殖的影響，結(jié)果顯示：骨痹康0.0750mg/mL、0.3750mg/mL、0.7500mg/mL三個濃度均可顯著促進正常和IL-1α誘導(dǎo)的軟骨細胞的增殖，療效呈劑量依賴性；(3)RT—PcR結(jié)果：所有標(biāo)本的mRNA擴增產(chǎn)物中都能看到預(yù)期長度的Ⅱ型膠原特異性條帶，IL-1α誘導(dǎo)的軟骨

5、細胞較正常軟骨細胞Ⅱ型膠原mRNA表達減弱；骨痹康0.7500mg/mL藥物濃度可顯著上調(diào)IL-1α誘導(dǎo)的軟骨細胞Ⅱ型膠原mRNA表達；(4)免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：各組標(biāo)本均可見Ⅱ型膠原表達，表達部位為胞漿，可見棕黃色顆粒。IL-1α誘導(dǎo)的軟骨細胞較正常軟骨細胞Ⅱ型膠原表達減弱；中藥骨痹康0.3750mg/mL和0.7500mg／mL藥物濃度均可促使IL-1α誘導(dǎo)的軟骨細胞Ⅱ型膠原表達增強。3 臨床研究結(jié)果：總體療效評價試驗組總有效率9

6、3.33％,優(yōu)于對照組70％；試驗組和對照組治療后WOMAC總指數(shù)以及疼痛、功能均較治療前明顯下降，有顯著差異(P<0.05～0.01)，僵硬無顯著性變化；治療后兩組WOMAC總指數(shù)和功能對比，無顯著性差異(P＞0.05)，兩藥在改蓋WOMAC總指數(shù)和功能方面效果相當(dāng)：試驗組和對照組疼痛改善情況比較，對照組的效果更好，有顯著差異(P＜0.05)；骨痹康方治療后能明顯降低疼痛指數(shù)，改善關(guān)節(jié)壓痛、腫脹和腰膝酸軟，效果較維骨力為好；骨痹康起效

7、較維骨力快；與對照組比較，試驗組合用泰諾林的人數(shù)和總量均較少；兩組均未發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重的不良反應(yīng)。 結(jié)論：骨痹康方對正常的和IL-1α誘導(dǎo)的軟骨細胞損傷模型有良好的促進增殖的作用，且成劑量依賴性；在轉(zhuǎn)錄水平有效阻止了IL-1為首的細胞因子對軟骨的損傷效應(yīng)，具有促進軟骨細胞合成代謝的某種/某些有效成分，在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平促進軟骨細胞的正常合成代謝，維持軟骨細胞正常Ⅱ型膠原表型的表達，對軟骨具有保護作用；能改善膝骨關(guān)節(jié)炎患者的臨床癥狀和體征，安全，