GGCX對(duì)兔骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞凋亡的影響及其對(duì)IL-1β、TNF表達(dá)的影響.pdf

1、研究目的：
　　探討慢病毒介導(dǎo)的γ谷氨?；然福╒itamin K dependent gamma-glutamyl carboxylase，GGCX）基因?qū)ν霉切躁P(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞凋亡的影響，以及對(duì)白細(xì)胞介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）、腫瘤壞死因子（Tumor necrosis factor，TNF）表達(dá)的影響，從而為GGCX基因運(yùn)用于骨性關(guān)節(jié)炎臨床治療提供理論依據(jù)。
　　研究方法：
　　1、選

2、取12只雄性日本大耳兔采用膝關(guān)節(jié)前交叉韌帶切斷術(shù)構(gòu)建模型，6周后將構(gòu)建好模型兔處死，并進(jìn)行軟骨細(xì)胞的分離，培養(yǎng)，運(yùn)用Ⅱ型膠原纖維染色和Alcian Blue染色法對(duì)培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞進(jìn)行鑒定。
　　2、將培養(yǎng)好的軟骨細(xì)胞隨機(jī)分成三組：空白對(duì)照組（不作處理）、陰性對(duì)照組（轉(zhuǎn)染不含GGCX慢病毒）、轉(zhuǎn)染組（轉(zhuǎn)染含GGCX慢病毒）。運(yùn)用qRT-PCR及Western blot檢測(cè)各組軟骨細(xì)胞中GGCX、Ⅱ型膠原、TNF、IL-1βmRNA及

3、蛋白表達(dá)水平。
　　3、采用Annexin V-FITC&PI法檢測(cè)上述各組細(xì)胞凋亡情況。
　　研究結(jié)果：
　　1、第1代骨性關(guān)節(jié)炎兔軟骨細(xì)胞呈多角形扁平狀，可有多個(gè)突起，Ⅱ型膠原纖維染色后可見(jiàn)細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)呈黃色或棕黃色，Alcian Blue染色后可見(jiàn)細(xì)胞呈現(xiàn)天藍(lán)色。
　　2、qRT-PCR和Western blot檢測(cè)結(jié)果示：轉(zhuǎn)染組GGCX及Ⅱ型膠原mRNA及蛋白水平表達(dá)較空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組明顯升高，

4、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組無(wú)明顯差異（P＞0.05）；轉(zhuǎn)染組TNF、IL-1βmRNA及蛋白水平表達(dá)較空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　3、Annexin V-FITC& PI法檢測(cè)各組凋亡率結(jié)果示：轉(zhuǎn)染組凋亡率為(17.833±2.577)％，較空白對(duì)照組（25.467±2.511)%及陰性對(duì)照組（26.167±

5、2.616)%明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、膝關(guān)節(jié)前交叉韌帶切斷術(shù)可以成功構(gòu)建骨性關(guān)節(jié)炎模型，并可以分離及培養(yǎng)出骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞；
　　2、轉(zhuǎn)染含GGCX慢病毒可以明顯增加軟骨細(xì)胞GGCX、Ⅱ型膠原的表達(dá)；
　　3、轉(zhuǎn)染含GGCX慢病毒可以明顯降低軟骨細(xì)胞TNF、IL-1β的表達(dá)；
　　4、轉(zhuǎn)染含GGCX慢病毒后可以抑制