TGFβ-1、IL-1β對(duì)退變髓核細(xì)胞中ADAMTS-4、ADAMTS-5、TIMP-3表達(dá)的影響.pdf

1、[目的]椎間盤組織代謝的穩(wěn)定伴隨著一系列復(fù)雜的和精確的協(xié)調(diào)，包括細(xì)胞因子、生長因子、酶和酶的抑制劑。近年來椎間盤退變的生物治療策略是通過前炎癥細(xì)胞因子上調(diào)關(guān)鍵基質(zhì)蛋白產(chǎn)生和減少分解代謝。TGF-β具有促進(jìn)人纖維環(huán)細(xì)胞分裂，及促進(jìn)椎間盤細(xì)胞合成蛋白多糖的作用，IL-1β參與分解代謝。它們兩者促人髓核細(xì)胞增殖的關(guān)系，是否通過對(duì)ADAMTS-4、-5、TIMP-3的調(diào)節(jié)來參與細(xì)胞外基質(zhì)代謝，以及它們?cè)谒韬思?xì)胞和組織中對(duì)ADAMTS-4、-5、

2、TIMP-3表達(dá)的影響，是本課題研究的內(nèi)容。
　　[方法]1選取Christian MRI退變3級(jí)且年齡小于40歲的患者髓核組織進(jìn)行體外培養(yǎng)，觀察人原代、傳代髓核細(xì)胞形態(tài)和生長狀態(tài)，并進(jìn)行細(xì)胞甲苯胺蘭染色和Ⅱ型膠原(CollagenⅡ)免疫組化標(biāo)記鑒定，通過CCK8檢測第三代髓核細(xì)胞生長活力，為下一步的實(shí)驗(yàn)研究奠定細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)。2通過CCK8檢測1ng/ml、10ng/ml TGFβ-1或IL-1β刺激48h對(duì)髓核細(xì)胞增殖的影響。3

3、通過RT-PCR定量分析，探討不同濃度TGFβ-1或IL-1β刺激不同時(shí)間，ADAMTS-4、ADAMTS-5及TIMP3 mRNA表達(dá)的變化情況。4免疫組化檢測ADAMTS-4、ADAMTS-5、TIMP-3及TGFβ-1、IL-1β在頸椎和腰椎退變髓核細(xì)胞和組織表達(dá)中的特點(diǎn)。5用Western blot方法進(jìn)行了頸椎和腰椎表達(dá)TGFβ-1、IL-1β、ADAMTS-4、ADAMTS-5和TIMP-3蛋白的定性。
　　[結(jié)果]1

4、10ng/mlTGFβ-1刺激48h對(duì)退變髓核細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用，10ng/mlIL-1β刺激48h對(duì)退變髓核細(xì)胞增殖有抑制作用。2在基因水平上，RT-PCR結(jié)果顯示:①隨著TGFβ-1濃度的升高，上調(diào)TIMP-3 mRNA的表達(dá)。②高濃度的TGFβ-1(10ng/ml)促進(jìn)髓核細(xì)胞表達(dá)ADAMTS-4 mRNA。③IL-1β(1ng/ml、10ng/ml)刺激48小時(shí)，上調(diào)ADAMTS-4 mRNA表達(dá)。④不同濃度IL-1β(0.1n

5、g/ml、1ng/ml、10ng/ml)刺激16h，ADAMTS-5 mRNA的表達(dá)明顯受到抑制。⑤不同濃度IL-1β(0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml)刺激24或48小時(shí)，對(duì)TIMP-3 mRNA相對(duì)表達(dá)量無調(diào)節(jié)作用。3在蛋白水平上，免疫組化檢測結(jié)果顯示:ADAMTS-4、 ADAMTS-5合成后主要分泌至基質(zhì)中;TIMP-3主要存在于細(xì)胞核和胞漿中;TGFβ-1表達(dá)在細(xì)胞膜上，是跨膜蛋白;IL-1β存在于細(xì)胞核和胞漿中