復(fù)元膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)性O(shè)A軟骨中TGF-β1、MMPs及ADAMTs的影響.pdf

1、目的:
　　研究復(fù)元膠囊對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨的組織形態(tài)學(xué)、軟骨組織中蛋白聚糖酶、基質(zhì)金屬蛋白酶及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1的影響、探討復(fù)元膠囊對(duì)骨關(guān)節(jié)炎軟骨組織保護(hù)作用的作用機(jī)制。
　　方法:
　　實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選取健康成年雄性SD大鼠180只，將大鼠隨機(jī)分為正常組，模型組，抗骨增生膠囊組，復(fù)元膠囊低、中、高劑量組，每組30只。采用改良的Hulths法造模，造模后各實(shí)驗(yàn)組分別給予相應(yīng)藥物灌胃治療，各組分別于4周（早期）、8周（中

2、期）、12周（晚期）取大鼠10只，取其膝軟骨全層，通過(guò)肉眼及光鏡觀察復(fù)元膠囊對(duì)骨關(guān)節(jié)炎軟骨組織形態(tài)學(xué)的影響。免疫組化法檢測(cè)OA軟骨組織中ADAMTs-4、ADAMTs-5、TGF-β1、MMP-1及MMP-3的水平。RT-PCR法檢測(cè)OA軟骨組織中ADAMTs-4、5、TGF-β1的mRNA水平。蛋白印跡法檢測(cè)OA軟骨組織中ADAMTs-4、ADAMTs-5、MMP-1、MMP-3及Ⅱ型膠原的蛋白水平。
　　結(jié)果:
　　1、

3、復(fù)元膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠膝OA軟骨組織形態(tài)學(xué)的影響。
　　正常組關(guān)節(jié)軟骨光滑平整。Hulths法造模后，模型組關(guān)節(jié)軟骨面在4周時(shí)開(kāi)始逐漸出現(xiàn)軟骨面糜爛、出現(xiàn)裂隙等病理改變;8周時(shí)OA軟骨面損傷加重;12周時(shí)軟骨面損傷最重?？构窃錾z囊組及復(fù)元膠囊組OA關(guān)節(jié)軟骨病理改變程度均較輕，且復(fù)元膠囊高劑量組關(guān)節(jié)軟骨面損傷最輕。
　　2、復(fù)元膠囊對(duì)大鼠膝OA關(guān)節(jié)軟骨中ADAMTs-4、ADAMTs-5的影響
　　免疫組化顯示:4周時(shí)，

4、模型組關(guān)節(jié)軟骨表層可見(jiàn)ADAMTs-4及ADAMTs-5表達(dá)，染色呈棕黃色，與正常組比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.01)。復(fù)元膠囊各組大鼠關(guān)節(jié)軟骨中ADAMTs-4、5表達(dá)量較模型組少，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01);與抗骨增生膠囊組比較，復(fù)元膠囊中、高劑量組關(guān)節(jié)軟骨中ADAMTs-4、5表達(dá)量少，以復(fù)元膠囊高劑量組為甚(p＜0.01)。
　　RT-PCT法測(cè)定mRNA表達(dá)顯示:正常組關(guān)節(jié)軟骨中ADAMTs-4、ADAMT

5、s-5mRNA僅見(jiàn)少許表達(dá)，4周（早期）模型組關(guān)節(jié)軟骨中mRNA表達(dá)水平明顯升高，以ADAMTs-5的mRNA表達(dá)升高為著，與正常組相比，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01);復(fù)元膠囊各組ADAMTs-4及ADAMTs-5的mRNA表達(dá)均有不同程度減少，復(fù)元膠囊中、高劑量組與模型組比較，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01);復(fù)元膠囊高劑量組與抗骨增生膠囊組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　蛋白印跡法測(cè)定其蛋白含量

6、顯示:與正常組比較，模型組關(guān)節(jié)軟骨中ADAMTs-4及ADAMTs-5的蛋白表達(dá)量明顯增加;且ADAMTs-5的蛋白表達(dá)量急劇增加，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)。復(fù)元膠囊中、高劑量組與模型組比較，ADAMTs-4及ADAMTs-5的蛋白表達(dá)少;且ADAMTs-5的蛋白表達(dá)量升高更明顯(p＜0.01);復(fù)元膠囊中、高劑量組與抗骨增生膠囊組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　3、復(fù)元膠囊對(duì)大鼠膝OA關(guān)節(jié)軟骨中MM

7、P-1、MMP-3及Ⅱ型膠原的影響
　　免疫組化顯示:4、8、12周時(shí)模型組全層軟骨均可見(jiàn)MMP-1、MMP-3的陽(yáng)性表達(dá)顆粒，位于胞漿內(nèi)，呈棕黃色。復(fù)元膠囊各組表達(dá)量均少于模型組(p＜0.05)，且12周時(shí)復(fù)元膠囊中、高劑量組MMP-1、MMP-3的表達(dá)量明顯少于模型組，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01);復(fù)元膠囊高劑量組MMP-1、MMP-3的表達(dá)量明顯少于抗骨增生膠囊組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　蛋

8、白印跡法檢測(cè)其蛋白表達(dá)量顯示:正常組僅見(jiàn)少量的MMP-1、MMP-3的蛋白表達(dá)，而模型組MMP-1、MMP-3的蛋白表達(dá)量高于正常組，以MMP-3的蛋白表達(dá)量更為明顯(p＜0.01);復(fù)元膠囊中、高劑量組MMP-1、MMP-3的蛋白含量明顯少于模型組，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01);復(fù)元膠囊高劑量組MMP-1、MMP-3的蛋白含量明顯少于抗骨增生膠囊組(p＜0.05)。
　　蛋白印跡法檢測(cè)Ⅱ型膠原表達(dá)量顯示:正常組大鼠關(guān)節(jié)

9、軟骨中Ⅱ型膠原含量豐富，模型組關(guān)節(jié)軟骨中Ⅱ型膠原含量較正常組明顯少，且隨時(shí)間推移程度加重(p＜0.01)。復(fù)元膠囊中、高劑量組Ⅱ型膠原的含量較模型組高，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)
　　4、復(fù)元膠囊對(duì)大鼠膝OA軟骨中TGF-β1的影響。
　　免疫組化顯示:正常組全層軟骨細(xì)胞的胞漿及胞核內(nèi)均可見(jiàn)TGF-β1的表達(dá)，4、8、12周時(shí)，模型組關(guān)節(jié)軟骨中TGF-β1的表達(dá)明顯減少，且隨著時(shí)間的增加其程度越嚴(yán)重。復(fù)元膠囊各組

10、表達(dá)量均高于模型組，其中復(fù)元膠囊高劑量組表達(dá)量最高，與模型組比較，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01);復(fù)元膠囊中、高劑量組表達(dá)量高于抗骨增生膠囊組(p＜0.05)。
　　RT-PCR測(cè)定mRNA顯示:正常組大鼠關(guān)節(jié)軟骨中TGF-β1mRNA的表達(dá)量較多，模型組關(guān)節(jié)軟骨中TGF-β1mRNA較正常組明顯少，且隨時(shí)間推移程度加重(p＜0.01)。復(fù)元膠囊中、高劑量組TGF-β1mRNA的表達(dá)量較模型組多，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p

11、＜0.01);復(fù)元膠囊中、高劑量組TGF-β1mRNA的表達(dá)量較抗骨增生膠囊組多(p＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.復(fù)元膠囊可改善Hulth法建立的大鼠膝OA模型關(guān)節(jié)軟骨組織形態(tài)變化，對(duì)軟骨退變有保護(hù)作用。
　　2.復(fù)元膠囊能抑制大鼠早期OA關(guān)節(jié)軟骨中ADAMTs-4及ADAMTs-5的表達(dá)，減少其對(duì)蛋白多糖的降解作用。
　　3.復(fù)元膠囊能促進(jìn)TGF-β1的表達(dá)，抑制大鼠OA模型關(guān)節(jié)軟骨中MMP-1、MMP-