復元膠囊對實驗性O(shè)A軟骨中TGF-β1、MMPs及ADAMTs的影響.pdf

1、目的:
　　研究復元膠囊對大鼠實驗性膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨的組織形態(tài)學、軟骨組織中蛋白聚糖酶、基質(zhì)金屬蛋白酶及轉(zhuǎn)化生長因子β1的影響、探討復元膠囊對骨關(guān)節(jié)炎軟骨組織保護作用的作用機制。
　　方法:
　　實驗動物選取健康成年雄性SD大鼠180只，將大鼠隨機分為正常組，模型組，抗骨增生膠囊組，復元膠囊低、中、高劑量組，每組30只。采用改良的Hulths法造模，造模后各實驗組分別給予相應(yīng)藥物灌胃治療，各組分別于4周（早期）、8周（中

2、期）、12周（晚期）取大鼠10只，取其膝軟骨全層，通過肉眼及光鏡觀察復元膠囊對骨關(guān)節(jié)炎軟骨組織形態(tài)學的影響。免疫組化法檢測OA軟骨組織中ADAMTs-4、ADAMTs-5、TGF-β1、MMP-1及MMP-3的水平。RT-PCR法檢測OA軟骨組織中ADAMTs-4、5、TGF-β1的mRNA水平。蛋白印跡法檢測OA軟骨組織中ADAMTs-4、ADAMTs-5、MMP-1、MMP-3及Ⅱ型膠原的蛋白水平。
　　結(jié)果:
　　1、

3、復元膠囊對實驗性大鼠膝OA軟骨組織形態(tài)學的影響。
　　正常組關(guān)節(jié)軟骨光滑平整。Hulths法造模后，模型組關(guān)節(jié)軟骨面在4周時開始逐漸出現(xiàn)軟骨面糜爛、出現(xiàn)裂隙等病理改變;8周時OA軟骨面損傷加重;12周時軟骨面損傷最重。抗骨增生膠囊組及復元膠囊組OA關(guān)節(jié)軟骨病理改變程度均較輕，且復元膠囊高劑量組關(guān)節(jié)軟骨面損傷最輕。
　　2、復元膠囊對大鼠膝OA關(guān)節(jié)軟骨中ADAMTs-4、ADAMTs-5的影響
　　免疫組化顯示:4周時，

4、模型組關(guān)節(jié)軟骨表層可見ADAMTs-4及ADAMTs-5表達，染色呈棕黃色，與正常組比較有顯著統(tǒng)計學差異(p＜0.01)。復元膠囊各組大鼠關(guān)節(jié)軟骨中ADAMTs-4、5表達量較模型組少，差異具有顯著統(tǒng)計學意義(p＜0.01);與抗骨增生膠囊組比較，復元膠囊中、高劑量組關(guān)節(jié)軟骨中ADAMTs-4、5表達量少，以復元膠囊高劑量組為甚(p＜0.01)。
　　RT-PCT法測定mRNA表達顯示:正常組關(guān)節(jié)軟骨中ADAMTs-4、ADAMT

5、s-5mRNA僅見少許表達，4周（早期）模型組關(guān)節(jié)軟骨中mRNA表達水平明顯升高，以ADAMTs-5的mRNA表達升高為著，與正常組相比，差異具有顯著統(tǒng)計學意義(p＜0.01);復元膠囊各組ADAMTs-4及ADAMTs-5的mRNA表達均有不同程度減少，復元膠囊中、高劑量組與模型組比較，差異具有顯著統(tǒng)計學意義(p＜0.01);復元膠囊高劑量組與抗骨增生膠囊組比較，差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。
　　蛋白印跡法測定其蛋白含量

6、顯示:與正常組比較，模型組關(guān)節(jié)軟骨中ADAMTs-4及ADAMTs-5的蛋白表達量明顯增加;且ADAMTs-5的蛋白表達量急劇增加，差異具有顯著統(tǒng)計學意義(p＜0.01)。復元膠囊中、高劑量組與模型組比較，ADAMTs-4及ADAMTs-5的蛋白表達少;且ADAMTs-5的蛋白表達量升高更明顯(p＜0.01);復元膠囊中、高劑量組與抗骨增生膠囊組比較，差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。
　　3、復元膠囊對大鼠膝OA關(guān)節(jié)軟骨中MM

7、P-1、MMP-3及Ⅱ型膠原的影響
　　免疫組化顯示:4、8、12周時模型組全層軟骨均可見MMP-1、MMP-3的陽性表達顆粒，位于胞漿內(nèi)，呈棕黃色。復元膠囊各組表達量均少于模型組(p＜0.05)，且12周時復元膠囊中、高劑量組MMP-1、MMP-3的表達量明顯少于模型組，差異具有顯著統(tǒng)計學意義(p＜0.01);復元膠囊高劑量組MMP-1、MMP-3的表達量明顯少于抗骨增生膠囊組，差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。
　　蛋

8、白印跡法檢測其蛋白表達量顯示:正常組僅見少量的MMP-1、MMP-3的蛋白表達，而模型組MMP-1、MMP-3的蛋白表達量高于正常組，以MMP-3的蛋白表達量更為明顯(p＜0.01);復元膠囊中、高劑量組MMP-1、MMP-3的蛋白含量明顯少于模型組，差異具有顯著統(tǒng)計學意義(p＜0.01);復元膠囊高劑量組MMP-1、MMP-3的蛋白含量明顯少于抗骨增生膠囊組(p＜0.05)。
　　蛋白印跡法檢測Ⅱ型膠原表達量顯示:正常組大鼠關(guān)節(jié)

9、軟骨中Ⅱ型膠原含量豐富，模型組關(guān)節(jié)軟骨中Ⅱ型膠原含量較正常組明顯少，且隨時間推移程度加重(p＜0.01)。復元膠囊中、高劑量組Ⅱ型膠原的含量較模型組高，差異具有顯著統(tǒng)計學意義(p＜0.01)
　　4、復元膠囊對大鼠膝OA軟骨中TGF-β1的影響。
　　免疫組化顯示:正常組全層軟骨細胞的胞漿及胞核內(nèi)均可見TGF-β1的表達，4、8、12周時，模型組關(guān)節(jié)軟骨中TGF-β1的表達明顯減少，且隨著時間的增加其程度越嚴重。復元膠囊各組

10、表達量均高于模型組，其中復元膠囊高劑量組表達量最高，與模型組比較，差異具有顯著統(tǒng)計學意義(p＜0.01);復元膠囊中、高劑量組表達量高于抗骨增生膠囊組(p＜0.05)。
　　RT-PCR測定mRNA顯示:正常組大鼠關(guān)節(jié)軟骨中TGF-β1mRNA的表達量較多，模型組關(guān)節(jié)軟骨中TGF-β1mRNA較正常組明顯少，且隨時間推移程度加重(p＜0.01)。復元膠囊中、高劑量組TGF-β1mRNA的表達量較模型組多，差異具有顯著統(tǒng)計學意義(p

11、＜0.01);復元膠囊中、高劑量組TGF-β1mRNA的表達量較抗骨增生膠囊組多(p＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.復元膠囊可改善Hulth法建立的大鼠膝OA模型關(guān)節(jié)軟骨組織形態(tài)變化，對軟骨退變有保護作用。
　　2.復元膠囊能抑制大鼠早期OA關(guān)節(jié)軟骨中ADAMTs-4及ADAMTs-5的表達，減少其對蛋白多糖的降解作用。
　　3.復元膠囊能促進TGF-β1的表達，抑制大鼠OA模型關(guān)節(jié)軟骨中MMP-1、MMP-