Ad-hBMP-4對(duì)人退變椎間盤髓核細(xì)胞的影響.pdf

1、目的:研究腺病毒介導(dǎo)骨形態(tài)發(fā)生蛋白4(adenovirus human bonemorphogenetic protein4，Ad-hBMP-4)轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)人退變腰椎間盤髓核細(xì)胞，分析對(duì)其影響。
　　方法:
　　(1)體外分離、培養(yǎng)人退變髓核細(xì)胞，HE染色和激光共聚焦分析Ⅱ型膠原表達(dá)位置。
　　(2)以第1代椎間盤細(xì)胞生長至70％-80％融合率為目的細(xì)胞，更換無血清培養(yǎng)基，加入Ad-GFP、Ad-hBMP-4，培養(yǎng)1

2、h后，換含20％胎牛血清DMEM/F12培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)3、6天，分P1細(xì)胞70％-80％融合率，Ad-GFP、Ad-hBMP-4轉(zhuǎn)染P1細(xì)胞3天，Ad-GFP、Ad-hBMP-4轉(zhuǎn)染P1細(xì)胞6天五組。
　　(3)應(yīng)用RT-PCR和Western blot法檢測(cè)各組細(xì)胞蛋白多糖、Ⅱ型膠原、Sox9基因及蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　(1)HE染色:P1細(xì)胞呈多角形、三角形，核被染成藍(lán)色，呈圓形或圓形，部分細(xì)胞聚集融合但核

3、仍明顯。胞漿被染成深淺不同的粉紅色至桃紅色。
　　(2)激光共聚焦示Ⅱ型膠原主要表達(dá)于椎間盤細(xì)胞胞漿。
　　(3) RT-PCR檢測(cè)蛋白多糖、Ⅱ型膠原、Sox9mRNA表達(dá)以及Westernblot檢測(cè)蛋白多糖、Ⅱ型膠原蛋白表達(dá)均顯著高于對(duì)照組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，實(shí)驗(yàn)組3、6d比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:Ad-hBMP-4可有效轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)人退變椎間盤細(xì)胞，并能促進(jìn)蛋白多糖、Ⅱ