Ad-hBMP-4對人退變椎間盤髓核細胞的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:研究腺病毒介導骨形態(tài)發(fā)生蛋白4(adenovirus human bonemorphogenetic protein4，Ad-hBMP-4)轉染體外培養(yǎng)人退變腰椎間盤髓核細胞，分析對其影響。
　　方法:
　　(1)體外分離、培養(yǎng)人退變髓核細胞，HE染色和激光共聚焦分析Ⅱ型膠原表達位置。
　　(2)以第1代椎間盤細胞生長至70％-80％融合率為目的細胞，更換無血清培養(yǎng)基，加入Ad-GFP、Ad-hBMP-4，培養(yǎng)1

2、h后，換含20％胎牛血清DMEM/F12培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)3、6天，分P1細胞70％-80％融合率，Ad-GFP、Ad-hBMP-4轉染P1細胞3天，Ad-GFP、Ad-hBMP-4轉染P1細胞6天五組。
　　(3)應用RT-PCR和Western blot法檢測各組細胞蛋白多糖、Ⅱ型膠原、Sox9基因及蛋白的表達。
　　結果:
　　(1)HE染色:P1細胞呈多角形、三角形，核被染成藍色，呈圓形或圓形，部分細胞聚集融合但核

3、仍明顯。胞漿被染成深淺不同的粉紅色至桃紅色。
　　(2)激光共聚焦示Ⅱ型膠原主要表達于椎間盤細胞胞漿。
　　(3) RT-PCR檢測蛋白多糖、Ⅱ型膠原、Sox9mRNA表達以及Westernblot檢測蛋白多糖、Ⅱ型膠原蛋白表達均顯著高于對照組，比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，實驗組3、6d比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結論:Ad-hBMP-4可有效轉染體外培養(yǎng)人退變椎間盤細胞，并能促進蛋白多糖、Ⅱ

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