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1、目的:構(gòu)建ADAMTS-5siRNA慢病毒載體,研究慢病毒載體介導(dǎo)的siRNA對(duì)大鼠離體軟骨細(xì)胞中ADAMTS-5基因表達(dá)的影響。
方法:針對(duì)ADAMTS-5基因RNAi有效靶點(diǎn)構(gòu)建大鼠pGCSIL-GFP-ADAMTS-5siRNA表達(dá)質(zhì)粒,使用慢病毒包裝系統(tǒng),在293T細(xì)胞中進(jìn)行包裝生產(chǎn)含ADAMTS-5siRNA的慢病毒顆粒,然后轉(zhuǎn)導(dǎo)入大鼠軟骨細(xì)胞。通過(guò)real-timePCR和Westernblot方法檢測(cè)轉(zhuǎn)導(dǎo)后軟骨細(xì)
2、胞ADAMTS-5基因mRNA及蛋白表達(dá)水平的變化。
結(jié)果:成功包裝大鼠含ADAMTS-5siRNA慢病毒顆粒。ADAMTS-5siRNA能順利轉(zhuǎn)入軟骨細(xì)胞,轉(zhuǎn)染率為80%;從Real-timePCR結(jié)果可以看出,大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中ADAMTS-5mRNA的表達(dá)量,干擾組明顯低于陰性對(duì)照組,差異有顯著性意義(P<0.05),Westernblot結(jié)果顯示,ADAMTS-5蛋白表達(dá)量,干擾組低于陰性對(duì)照組,差異有顯著性意義(P<
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