慢病毒介導(dǎo)的TNF-α SiRNA在C型Niemann-Pick病小鼠神經(jīng)變性中的作用研究.pdf

1、神經(jīng)系統(tǒng)的慢性炎癥在神經(jīng)變性疾病中起很關(guān)鍵的作用，與軸索變性和神經(jīng)元脫失密切相關(guān)，包括阿爾茨海默病（AD），帕金森病（PD），肌萎縮側(cè)索硬化（ALS）和C型Niemann-Pick病（NPC）等神經(jīng)變性疾病。越來越多的證據(jù)表明，小膠質(zhì)細(xì)胞激活并釋放過量的TNF-α參與并加速了神經(jīng)元變性的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致神經(jīng)元功能失調(diào)，突觸調(diào)節(jié)異常以及淀粉樣蛋白介導(dǎo)的記憶障礙。有多項(xiàng)研究證實(shí)，應(yīng)用TNF-α抑制劑以及TNF-α-SiRNA降低其水平可以改善

2、臨床AD病人的認(rèn)知功能以及改善AD模型小鼠的神經(jīng)病理?yè)p害。但是TNF-α是否為神經(jīng)變性疾病發(fā)病機(jī)理中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)尚不清楚。Npc-1基因自然突變的npc小鼠模擬了人類NPC的病理生理變化，非常適合用來研究NPC以及其他的神經(jīng)變性疾病。我們前期研究發(fā)現(xiàn)npc小鼠腦部膠質(zhì)細(xì)胞活化并分泌大量的TNF-α，但是TNF-α在npc小鼠病理變化以及病情進(jìn)展過程中的作用尚不明確。因此，我們應(yīng)用這種動(dòng)物模型和TNF-α-SiRNA來觀察TNF-α對(duì)npc

3、小鼠病理學(xué)以及行為學(xué)的影響，進(jìn)而探討TNF-α在神經(jīng)變性過程中扮演的角色。本實(shí)驗(yàn)中，我們首先構(gòu)建了攜帶TNF-α-SiRNA的慢病毒載體，感染體外培養(yǎng)細(xì)胞，通過RT-PCR以及ELISA檢測(cè)了其對(duì)TNF-αmRNA的沉默作用；同時(shí)對(duì)4周齡的npc小鼠進(jìn)行該慢病毒側(cè)腦室注射，通過Real-time-PCR以及免疫組化檢測(cè)其沉默效率，并運(yùn)用免疫組化、western-blot、體重測(cè)定、衣架懸掛實(shí)驗(yàn)及足印實(shí)驗(yàn)來評(píng)價(jià)npc小鼠病理及行為學(xué)變化。