川芎嗪對(duì)炎性損傷的內(nèi)皮細(xì)胞及小膠質(zhì)細(xì)胞的保護(hù)作用研究.pdf

1、血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙和小膠質(zhì)細(xì)胞的激活分別與心腦血管疾?。ㄈ鐒?dòng)脈粥樣硬化）和神經(jīng)退行性病變（如老年性癡呆）有著密切的聯(lián)系，炎癥損傷是重要的誘因，控制炎癥發(fā)生是改善內(nèi)皮細(xì)胞功能，抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化，保護(hù)二者免受損傷，預(yù)防和治療心血管疾病和神經(jīng)系統(tǒng)疾病的一個(gè)重要手段。本研究主要探討中藥活性成分川芎嗪（TMP）對(duì)炎性損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的保護(hù)作用。
　　 PartⅠ：TMP對(duì)炎性損傷的內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用研究
　　 為

2、了探討TMP對(duì)氧化應(yīng)激所致內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用，首先，采用體外自由基清除試驗(yàn)證明川芎嗪具有顯著的OH清除能力，對(duì)DPPH和NO均具有一定的清除能力，而對(duì)H2O2及脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)清除作用不明顯。其次，我們以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）為模型探討TMP對(duì)H2O2誘導(dǎo)的氧化損傷的保護(hù)作用。結(jié)果表明，TMP預(yù)處理24 h可抑制H2O2引起的HUVEC細(xì)胞活力下降，并呈濃度依賴關(guān)系（76.5％vs control，P<0.05，H2O240

3、0μM for12 h；88.7％vs control，TMP150μg/ml時(shí)），并抑制胞內(nèi)ROS的生成（83.1％vs H2O2組，P<0.05，TMP150μg/ml）。另外，TMP上調(diào)超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的活性（TMP為150μg/ml時(shí)分別為H2O2組的144.1％和118.3％，P<0.05），降低細(xì)胞內(nèi)MDA、NO及NOS的水平（TMP為150μg/ml時(shí)分別為H2O2組的83.8％，91.2％and78.7

4、％，P<0.05），并且TMP預(yù)孵育24 h有效抑制H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和周期改變。
　　 為了驗(yàn)證TMP對(duì)炎癥誘發(fā)的內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用，檢測(cè)了TMP對(duì)LPS誘導(dǎo)引起的HUVEC細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。以TMP與LPS同內(nèi)皮細(xì)胞孵育后不引起細(xì)胞活力的明顯改變（P>0.05）條件下確定藥物濃度，排除實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭兴幬锛?xì)胞毒作用。結(jié)果顯示，LPS可抑制細(xì)胞NOS活性（67.3％vs control組，P<0.05）及胞內(nèi)外NO含量（分別為

5、control組的68.8％和87.2％，P<0.05），增加胞內(nèi)ROS水平（195.2％vs control組，P<0.01），促進(jìn)細(xì)胞凋亡（150.6％vs control組，P<0.05），抑制正常細(xì)胞周期的進(jìn)程（G0/G1期細(xì)胞109.9％vs control組，P<0.05），而TMP可恢復(fù)LPS所致的上述效應(yīng)，并具有濃度依賴關(guān)系。綜上，此部分研究證明TMP可以抑制H2O2及LPS誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷。
　　 PaltⅡ

6、：TMP對(duì)炎性損傷的小膠質(zhì)細(xì)胞的保護(hù)作用研究
　　 為了探討TMP對(duì)LPS誘導(dǎo)的N9小膠質(zhì)細(xì)胞炎性激活的保護(hù)作用，N9細(xì)胞先與。TMP（對(duì)照為不含藥物培養(yǎng)基）孵育4-24 h再加LPS刺激，測(cè)定細(xì)胞活力，確立試驗(yàn)?zāi)Ｐ偷挠盟帩舛群妥饔脮r(shí)間，在此條件下測(cè)定相應(yīng)的生物效應(yīng)。結(jié)果顯示：TMP對(duì)硝普鈉溶液中產(chǎn)生的NO產(chǎn)物沒(méi)有直接清除作用，但可抑制LPS誘導(dǎo)的N9細(xì)胞中NO的分泌。而且，TMP在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平下調(diào)LPS誘導(dǎo)的N9細(xì)胞iNOS

7、的高表達(dá)。同時(shí)，TMP抑制LPS誘導(dǎo)的N9細(xì)胞中NF-κB從胞漿到胞核的核轉(zhuǎn)位，抑制p38 MAPK、ERK1/2、JNK及Akt的磷酸化水平，但對(duì)P13K的磷酸化影響不明顯。深入研究表明，p38 MAPK、ERK1/2、JNK及P13K特異性抑制劑可以抑制LPS誘導(dǎo)的iNOS蛋白水平的表達(dá)。另外，TMP還可抑制LPS誘導(dǎo)的N9細(xì)胞中ROS的形成。表明：TMP通過(guò)MAPK和P13K途徑抑制LPS誘導(dǎo)的NO及iNOS的表達(dá)，并可抑制胞內(nèi)R