1,4,5-三磷酸肌醇受體在異氟醚致神經(jīng)元樣PC12細胞凋亡中的作用.pdf

1、目的:雖然目前鹵族吸入麻醉藥在臨床麻醉中的應用是比較安全有效的，但是越來越多的實驗研究發(fā)現(xiàn)術后認知功能障礙或神經(jīng)退行性變與鹵族吸入麻醉藥有關。研究表明異氟醚可以對多種類型細胞和組織產生毒性作用，異氟醚對神經(jīng)元毒性作用機制尚未定論，其中通過誘導內質網(wǎng)鈣離子(Ca2+)釋放導致細胞內鈣失調是其重要的作用機制。細胞內Ca2+穩(wěn)態(tài)的調節(jié)主要由內質網(wǎng)膜上的三種受體共同作用，包括鈣泵(Ca2+ATPase)、1，4，5-三磷酸肌醇受體(IP3R)及

2、藍尼啶受體(RyR)。本文旨在探討內質網(wǎng)IP3R在異氟醚致神經(jīng)元樣PC12細胞凋亡中的作用。
　　 方法:本實驗選擇大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞株（PC12細胞），處于對數(shù)生長期經(jīng)50ng/ml2.5s神經(jīng)生長因子(Nervegrowthfactor,NGF)孵育7d后，作為神經(jīng)元細胞模型，神經(jīng)元樣PC12細胞廣泛應用于神經(jīng)生理、病理及藥理等方面的研究。采用隨機數(shù)字表法，將神經(jīng)元樣PC12細胞隨機分為四組（n=6）:空白對照組（C組

3、）、IP3R拮抗劑組（Ⅹ組）、異氟醚組（Ⅰ組）、異氟醚+IP3R拮抗劑組（Ⅰ+Ⅹ組）。C組正常培養(yǎng)，不作任何處理;Ⅰ組和Ⅰ+Ⅹ組進行異氟醚處理，濃度維持在1.2％(1MAC)，持續(xù)12h;Ⅹ組和Ⅰ+Ⅹ組預先加入IP3R拮抗劑-XestospongiaC100nM處理30min。12h后采用AnnexinⅤ/PI雙染法和Tunel法測定細胞凋亡率(ApoptosisRate，AR)，F(xiàn)our-3/Am測定胞漿Ca2+濃度，RT-PCR法測

4、定Ⅰ-IP3RmRNA表達。
　　 結果:與C組比較，Ⅹ組細胞AR和胞漿Ca2+濃度差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，但Ⅰ-IP3RmRNA表達下調(P＜0.05)，Ⅰ組和Ⅰ+Ⅹ組細胞AR增加，胞漿Ca2+濃度升高，Ⅰ組Ⅰ-IP3RmRNA表達上調(P＜0.05)，但Ⅰ+Ⅹ組Ⅰ-IP3RmRNA表達差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);與Ⅹ組比較，Ⅰ組和Ⅰ+Ⅹ組細胞AR增加、胞漿Ca2+濃度升高、Ⅰ-IP3RmRNA表達上調（P＜0

5、.05）;與Ⅰ組比較，Ⅰ+Ⅹ組細胞AR減少，胞漿Ca2+濃度降低，Ⅰ-IP3RmRNA表達下調(P＜0.05)。
　　 結論:1.2％異氟醚處理神經(jīng)元樣PC12細胞12h細胞凋亡率增加，其機制是細胞內鈣平衡調節(jié)紊亂，導致細胞內鈣超載，可能部分與內質網(wǎng)膜上的Ca2+釋放通道Ⅰ-IP3R表達上調有關。IP3R拮抗劑可使Ⅰ-IP3RmRNA表達下調，部分抑制異氟醚導致細胞凋亡率和胞漿Ca2+濃度的增加，Ⅰ-IP3R是其重要的作用靶點。