基于肝細(xì)胞毒價(jià)檢測的何首烏質(zhì)量控制方法研究.pdf

1、何首烏為蓼科植物何首烏Polygonum multiflorum Thunb.的干燥塊根，是一味傳統(tǒng)的補(bǔ)益類中藥，臨床應(yīng)用廣泛。但是近年來國內(nèi)外相繼出現(xiàn)了關(guān)于何首烏導(dǎo)致肝損傷的臨床報(bào)道，引起人們的高度關(guān)注。前期調(diào)研發(fā)現(xiàn)藥材質(zhì)量問題是其引發(fā)肝損傷的重要原因之一。然而何首烏現(xiàn)有的質(zhì)量控制方法主要是基于指標(biāo)性成分的含量測定，這些質(zhì)控指標(biāo)與安全性關(guān)聯(lián)還不夠緊密，尤其是還無法控制炮制減毒的過程，難以保障臨床用藥安全。因此，何首烏的質(zhì)量控制方法和手

2、段還有待拓展。
　　 本文從生物檢定的角度，探索建立何首烏肝細(xì)胞毒價(jià)檢測方法，以期更準(zhǔn)確的表征藥材整體的肝毒性。為從藥材質(zhì)量問題層面降低何首烏臨床肝損害的發(fā)生提供方法學(xué)支持。本研究主要內(nèi)容及結(jié)果如下:
　　 1.肝細(xì)胞毒價(jià)檢測方法的研究:根據(jù)何首烏產(chǎn)生肝損傷作用的藥理特征，以正常人肝細(xì)胞系（L02細(xì)胞）作為研究對象，以細(xì)胞抑制率作為檢測指標(biāo)。通過對照品，藥材提取方法，檢測方法及檢測條件的篩選和優(yōu)化:選定對乙酰氨基酚為對照

3、品;50％的乙醇，10倍量溶劑，超聲30 min制備藥材供試品;CCK-8法檢測細(xì)胞抑制率，其條件為3.5×104個(gè)·mL-1的細(xì)胞進(jìn)行接種，藥物孵育24 h，5％的CCK-8反應(yīng)60 min后檢測吸光度。細(xì)胞抑制率進(jìn)行三次方的數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化，采用量反應(yīng)平行線(2·2)法計(jì)算樣品毒價(jià)。
　　 2.基于肝細(xì)胞毒價(jià)的何首烏炮制減毒研究:10批不同產(chǎn)地的生首烏毒價(jià)均值為329 U·g-1，毒價(jià)差異較小(RSD=8％)。而18種自制何首烏炮制

4、品毒價(jià)檢測結(jié)果顯示，樣品毒價(jià)均隨著炮制時(shí)間的增加而降低，并且最終趨于穩(wěn)定。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)高壓清蒸法炮制2個(gè)小時(shí)后，樣品毒價(jià)降低到135 U·g-1，并且已經(jīng)基本穩(wěn)定。與常壓清蒸法和高壓黑豆汁蒸法相比，高壓清蒸法不僅對毒性的降低作用較為明顯，同時(shí)效率也較高。
　　 3.市售藥材及相關(guān)中成藥的毒價(jià)檢測:通過對2個(gè)臨床已產(chǎn)生肝損害的制何首烏藥材進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示2個(gè)樣品的毒價(jià)均較高，其中1個(gè)接近生首烏的毒價(jià)，為297 U·g-1，說明藥材