制何首烏化學(xué)成分及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.pdf

1、和其他國(guó)家的草藥、天然藥物相比,中藥的一個(gè)顯著特色是炮制后才能用于臨床。古人云:“制藥如練兵,率未練之兵不能克敵制勝,用未制之藥難得藥到病除”,由此可知,炮制對(duì)中藥的重要性可見一斑。然而,炮制之所以對(duì)藥物的藥性、功效影響如此之大,究其根本是炮制對(duì)其內(nèi)在物質(zhì)基礎(chǔ)的改變。研究中藥炮制前后化學(xué)成分組成的變化,對(duì)闡明中藥炮制的原理和制訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)具有重要意義。
　　 何首烏為蓼科植物何首烏Polygonum multiflorum Thu

2、nb.的干燥根莖。生何首烏具有解毒、消癰、潤(rùn)腸通便之功效,用于瘰疬瘡癰、風(fēng)疹瘙癢、腸燥便秘、高血脂。制何首烏為何首烏的炮制加工品,具有補(bǔ)肝腎、益精血、烏須發(fā)、強(qiáng)筋骨的功效,用于血虛萎黃、眩暈耳鳴、須發(fā)早白、腰膝酸軟、肢體麻木、崩漏帶下、久瘧體虛、高血脂。為闡明中藥何首烏炮制前后功效的改變,制訂科學(xué)合理的制何首烏的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法,本文對(duì)制何首烏的化學(xué)成分進(jìn)行了提取分離,在此基礎(chǔ)上建立了區(qū)別何首烏與制何首烏的薄層層析鑒別方法,研究了制何首烏的

3、HPLC特征圖譜分析方法及與主要有效成分含量的關(guān)系,就不同炮制工藝和方法對(duì)何首烏中主要有效成分含量的影響進(jìn)行了研究。
　　 1文獻(xiàn)綜述
　　 綜合評(píng)價(jià)分析了何首烏在本草學(xué)、炮制學(xué)、質(zhì)量控制、化學(xué)成分、藥理學(xué)、臨床應(yīng)用等相關(guān)領(lǐng)域的研究文獻(xiàn),為制定切實(shí)可行的研究方案,確定研究考察指標(biāo)及研究工作起點(diǎn)奠定了基礎(chǔ)。
　　 2實(shí)驗(yàn)研究
　　 2.1制何首烏化學(xué)成分研究
　　 采用50％乙醇對(duì)制何首烏進(jìn)行提取,

4、提取液減壓濃縮,加水混勻,依次用乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行提取。乙酸乙酯提取物經(jīng)過柱層層析分離,得到10個(gè)化合物。通過顏色反應(yīng)、熔點(diǎn)測(cè)定以及光譜數(shù)據(jù)(UV、MS、1H-NMR、13C-NMR.)的測(cè)定確定了其結(jié)構(gòu)。10個(gè)化合物分別為大黃素(emodin)、大黃素甲醚(physcion)、丁二酸(succinic acid)、5-羥甲基糠醛(5-hydroxymethylfurfural)、對(duì)羥基苯甲醛(4-Hydroxybenzaldehyd

5、e)、沒食酸(garllicacid)、對(duì)苯二酚(hydroquinone)、2,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-O—β—D-葡萄糖苷(2,3,5,4’-tetrahydroxy-stilbene-2-O-β-D-glucoside)、大黃素-8-O-β—D-葡萄糖苷(emodin-8-O-β-D-glucoside)、大黃素甲醚-8-O-β—D-葡萄糖苷(physcion一8-O-β-D-glucoside)。其中丁二酸(succi

6、nicacid)和5-羥甲基糠醛(5-hydroxymethylfurfural)為首次在制何首烏中發(fā)現(xiàn)。
　　 2.2制何首烏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究
　　 2.2.1建立了區(qū)別何首烏生品與炮制品的薄層層析鑒別方法
　　 目前對(duì)何首烏生品與炮制品采用相同的薄層層析鑒別方法。本文在制何首烏化學(xué)成分研究基礎(chǔ)上,選擇分離得到的5-羥甲基糠醛為對(duì)照品,采用硅膠GF254薄層板,以石油醚(60～90℃)一乙酸乙酯(1:1)為展開劑,

7、展開,取出,晾干,紫外光燈(254 nm)下檢視,制何首烏色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn),何首烏色譜在相應(yīng)的位置上沒有顯相同顏色的斑點(diǎn)。
　　 2.2.2制何首烏HPLC特征圖譜研究
　　 在對(duì)15個(gè)批次制何首烏飲片研究的基礎(chǔ)上,建立了制何首烏高效液相特征圖譜分析方法,最多檢出峰18個(gè)。結(jié)合主要有效成分2,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β—D-葡萄糖苷(簡(jiǎn)稱:二苯乙烯苷)的含量測(cè)定結(jié)果,顯示特

8、征峰的檢出率與含量之間呈現(xiàn)正相關(guān),二苯乙烯苷含量高,則特征峰檢出率高。符合藥典標(biāo)準(zhǔn)的制何首烏樣品特征峰檢出率在88％以上,共有的色譜峰16個(gè)。
　　 2.2.3制何首烏中二苯乙烯苷含量測(cè)定
　　 對(duì)小同地區(qū)采購的15個(gè)批次的制何首烏中二苯乙烯苷的含量進(jìn)行了測(cè)定,研究結(jié)果表明制何首烏中二苯乙烯苷含量為0.127～4.15％,表明不同地區(qū)樣品之間存在很大差異,有些不符合《中華人民共和國(guó)藥典》2005年版一部制何首烏中二苯乙烯

9、苷含量不得低于0.70％的規(guī)定。
　　 2.3炮制對(duì)何首烏中二苯乙烯苷含量的影響
　　 針對(duì)全國(guó)不同省市何首烏炮制工藝不統(tǒng)一,缺乏規(guī)范的炮制工藝參數(shù)的現(xiàn)狀,研究了不同炮制工藝即豆汁蒸、豆汁燉、清蒸、豆汁高壓蒸和豆汁屜上蒸以及不同炮制時(shí)間對(duì)何首烏中主要有效成分二苯乙烯苷含量的影響。結(jié)果顯示二苯乙烯苷含量:生片>豆汁高壓蒸片>豆汁燉片>豆汁蒸片>清蒸片>豆汁屜上蒸片。何首烏采用黑豆汁燉,隨炮制時(shí)間的延長(zhǎng),二苯乙烯苷含量逐漸下