臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合γ-氨基丁酸對(duì)1型糖尿病患者外周血單個(gè)核細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)研究.pdf

1、目的:通過將不同濃度的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(hUCMSCs)以及聯(lián)合γ-氨基丁酸(GABA)與1型糖尿病患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)共同培養(yǎng)，研究其對(duì)PBMC免疫應(yīng)答反應(yīng)的影響，并探討其作用機(jī)制。
　　 方法:建立不同濃度hUCMSCs以及聯(lián)合GABA與1型糖尿病患者PBMC的共培養(yǎng)體系。以hUCMSCs為刺激細(xì)胞，GABA為刺激物，以1型糖尿病患者PBMC為反應(yīng)細(xì)胞，按照hUCMSCs的濃度不同，分為6組。對(duì)照組:1×105

2、PBMC單獨(dú)培養(yǎng);低濃度組:1×104hUCMSC與1×105PBMC共培養(yǎng);中濃度組:1×105hUCMSC與1×105 PBMC共培養(yǎng);高濃度組1×106hUCMSC與1×105 PBMC共培養(yǎng);聯(lián)合組:1×105hUCMSC聯(lián)合GABA（100μmmol/L）與1×105PBMC共培養(yǎng)。甘露醇組:1×105hUCMSC（中濃度）聯(lián)合甘露醇(100μ mmol/L)與1×105PBMC共培養(yǎng)，以上混合反應(yīng)體系培養(yǎng)72h后，流式細(xì)胞術(shù)

3、檢測(cè)CD4+、CD8+、CD4+CD25+T淋巴細(xì)胞的數(shù)量及比例，取各反應(yīng)體系細(xì)胞培養(yǎng)上清，ELISA法檢測(cè)IL-2，IL-10，AGEs水平。
　　 結(jié)果:流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示，將不同濃度的hUCMSCs與T1DM患者PBMC共培養(yǎng)后，各反應(yīng)體系中CD4+T細(xì)胞及CD4+/CD8+T細(xì)胞比例均明顯下降，而CD8+T、CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例顯著上升(P＜0.05)，且呈劑量依賴性。ELISA檢測(cè)結(jié)果表明，應(yīng)用hUC

4、MSCs后，各反應(yīng)體系細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-2水平明顯下降，而IL-10明顯上升(P＜0.05)，且呈劑量依賴性，AGEs水平明顯下降，且在一定濃度范圍內(nèi)呈劑量依賴性。中濃度的hUCMSCs與GABA聯(lián)合后，與單純高濃度hUCMSCs組相比，CD4+T細(xì)胞及CD4+/CD8+T細(xì)胞比例均明顯下降，而CD8+T、 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例顯著上升(P＜0.05)，細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-2水平明顯下降，而IL-10明顯上升(P＜0.0