益骨顆粒對原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的治療作用及其機制探討.pdf

1、目的:
　　對益骨顆粒治療骨質(zhì)疏松癥的作用進行藥效學(xué)評價，并從血鈣濃度、骨形成-骨吸收的耦聯(lián)狀態(tài)、成骨細胞的增殖分化等方面對該治療作用的機制進行探討。
　　方法:
　　1.益骨顆粒對雙側(cè)卵巢摘除大鼠骨質(zhì)疏松癥的治療作用
　　SD雌性大鼠隨機分為假手術(shù)組、模型組、雌二醇組、益骨顆粒低、中、高組。除假手術(shù)組外，其余動物雙側(cè)摘除卵巢以制備骨質(zhì)疏松癥模型，假手術(shù)組動物不摘除卵巢，只剪去卵巢附近約19的脂肪。術(shù)后一周，動物

2、分別灌胃給藥，劑量分別為:雌二醇0.0003 g· kg-1·d-1、益骨顆粒低劑量0.4g·kg-1·d-1、中劑量0.8g· kg-1·d-1、高劑量1.6g·kg-1·d-1，假手術(shù)組和模型組動物給予等量蒸餾水，連續(xù)治療16周。給藥后第12、16周，分別對動物全身的骨密度進行檢測。動物處死前第14天皮下注射鹽酸四環(huán)素，25mg/kg;處死前第4天皮下注射鈣黃素，10mg/kg以制備熒光標記。末次給藥后1h，動物腹腔注射戊巴比妥鈉3

3、0mg/kg麻醉，腹主動脈取血，分離血清，利用ELSIA法檢測血清中骨鈣素、抗酒石酸酸性磷酸酶5b的含量，利用全自動生化儀檢測血清中鈣、磷、堿性磷酸酶的含量。取血完畢，動物處死，取其子宮、腰椎、雙側(cè)股骨及左側(cè)脛骨。子宮用于制作病理切片，觀察益骨顆粒對子宮的影響;腰椎和右側(cè)股骨用于離體骨密度檢測;左側(cè)股骨用于生物力學(xué)指標的檢測;左側(cè)脛骨用于制作切片，觀察該藥對骨組織形態(tài)計量學(xué)指標（骨外膜形成率等）的影響。
　　2.益骨顆粒對大鼠成骨

4、細胞增殖分化及其合成分泌堿性磷酸酶作用的影響
　　取新生2日齡SD大鼠顱骨，利用酶消化，對其中的成骨細胞進行原代分離，并行形態(tài)學(xué)觀察與堿性磷酸酶染色鑒定。制備雌二醇、益骨顆粒低、中、高劑量的含藥血清，按體系數(shù)濃度的10％加入第三代成骨細胞培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48h、72h后，CCK-8法檢測成骨細胞增殖狀況，磷酸對硝基苯酯法檢測細胞中堿性磷酸酶水平。
　　結(jié)果:
　　1.益骨顆粒對雙側(cè)卵巢摘除大鼠骨質(zhì)疏松癥的治療作用

5、>　　(1)與模型組相比，給藥3個月后，益骨顆粒高劑量組能顯著提高動物的骨密度;給藥4個月后，益骨顆粒各劑量組均能顯著提高動物的骨密度值。此外，益骨顆粒中、高劑量組能顯著提高股骨、腰椎的骨密度。
　　(2)與模型組相比，益骨顆粒中劑量可顯著地提高血清鈣的水平。此外，益骨顆粒中、高劑量組血清的OCN、TRACP5b有顯著性地降低。
　　(3)在生物力學(xué)實驗中，益骨顆粒中、高劑量組動物股骨的最大彎曲應(yīng)力、最大應(yīng)變、骨剛性系數(shù)較模

6、型組有顯著性地提高。
　　(4)通過脛骨骨組織形態(tài)計量學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，益骨顆粒高劑量可顯著性地提高骨小梁面積百分數(shù);而中、高劑量可降低骨小梁分離度，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義。此外，益骨顆粒中、高劑量可降低骨外膜熒光周長百分數(shù)，而各劑量也可顯著性地降低骨外膜形成率。
　　2.益骨顆粒對大鼠成骨細胞增殖分化及其合成分泌堿性磷酸酶作用的影響
　　(1)與對照組相比，經(jīng)益骨顆粒各劑量含藥血清培養(yǎng)72h后，成骨細胞的增殖率有顯著性的提高。<

7、br>　　(2)與對照組相比，經(jīng)益骨顆粒各劑量含藥血清培養(yǎng)48h后，成骨細胞堿性磷酸酶水平有顯著性的提高。
　　結(jié)論:
　　大鼠雙側(cè)卵巢摘除，是制備骨質(zhì)疏松模型的經(jīng)典方法，該模型可出現(xiàn)臨床上骨質(zhì)疏松癥的一系列特征，如鈣質(zhì)的流失、骨密度的下降、骨組織顯微結(jié)構(gòu)破壞、骨生物力學(xué)功能下降和骨代謝相關(guān)指標的變化等。基于此模型，本課題發(fā)現(xiàn)益骨顆粒不僅可以提高模型動物的骨密度值，對骨質(zhì)疏松所引起的骨組織顯微結(jié)構(gòu)破壞和骨生物力學(xué)功能下降都有