觸須感覺信息輸入減少誘導桶狀皮層錐體神經元和GABAergic神經元功能的可塑性.pdf

1、目的：建立小鼠觸須感覺信息輸入減少的動物模型，分析觸須感覺信息輸入減少后，桶狀皮層（Barrel Cortex）錐體神經元和GABA能神經元內在特性和神經元群集發(fā)放動作電位編碼功能的變化，探討神經網絡功能的可塑性機制。
　　方法：1.小鼠觸須感覺信息輸入減少模型的建立：將FVB-Tg（Gad GFP）4570Swn/J小鼠右側嘴角部全部觸須修剪至小于1mm，每24小時修剪一次，從出生后7天開始修剪持續(xù)到出生后17天。
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2、.在上述處理10天以后，應用T迷宮實驗檢測小鼠嗅覺功能變化，實驗中小鼠移動到食物一側的成功率作為鑒別其嗅覺功能上調的指標。
　　3.膜片鉗電生理實驗：取出生1周后小鼠，連續(xù)造模后10天，用異氟烷吸入麻醉，迅速將大腦分離，做冠狀切片（400μm），然后將腦片置于氧合的人工腦脊液(ASCF)中，25?C下孵育1-2小時后轉移至灌流槽，在31?C下對腦片進行灌流；采用IR-DIC光學顯微鏡(Nikon E600FN)熒光顯微鏡定位大腦桶

3、狀皮層綠色熒光蛋白標記的GABA能神經元和錐體神經元；運用Axoclamp-200B放大器，電流鉗模式全細胞記錄方法記錄大腦桶狀皮層GABA能神經元和錐體神經元的動作電位，測量其發(fā)放容量及閾電位(threshold potentials, Vts)，電壓鉗模式全細胞記錄方法采集GABA能神經元sIPSCs（自發(fā)性抑制性突觸后電流）包括電流間距（Interval of Events， IE）和電流幅度（Amplitude）數(shù)據，信號數(shù)據輸

4、入Clampex10.1進行處理分析。結果：1.造模組小鼠對食物的正確選擇成功率明顯高于正常組小鼠；2.應用膜片鉗方法，電流鉗模式實驗結果發(fā)現(xiàn)，與正常組相比，造模組桶狀皮層錐體神經元群集發(fā)放動作電位的發(fā)放容量顯著增加，動作電位間距ISI縮短(P<0.05)，閾電位(Vts)降低(P<0.05)；GABA能神經元群集發(fā)放動作電位的發(fā)放容量顯著降低，動作電位間距 ISI延長(P<0.05)，閾電位(Vts)升高(P<0.05)；3.電壓鉗模