小鼠嗅皮層不同類神經(jīng)元功能可塑性在聯(lián)合式學習記憶中的作用.pdf

1、目的：建立小鼠聯(lián)合式學習記憶的動物模型，通過T迷宮實驗驗證信息提取是否具有互為性，采用電生理實驗方法，研究小鼠嗅皮層谷氨酸能神經(jīng)元和GABA能神經(jīng)元內(nèi)在特性和突觸傳遞效應(yīng)的變化。
　　方法：1．條件反射模型的建立：選擇出生后10天的C57BL-6-gfp小鼠，以乙酸丁酯作為氣味源的無關(guān)刺激，經(jīng)過訓練10天后變?yōu)闂l件刺激，非條件刺激是5Hz的觸須觸覺刺激，建立小鼠觸須觸覺和嗅覺的條件反射動物模型。
　　2．行為學實驗：實驗分為

2、四組：空白對照組、嗅覺訓練組、觸覺訓練組、聯(lián)合訓練組，應(yīng)用T迷宮檢測小鼠嗅覺功能變化，實驗中給予小鼠5Hz的觸須觸覺刺激，小鼠回避乙酸丁酯的概率作為鑒別其嗅覺功能上調(diào)的指標。
　　3．膜片鉗電生理實驗：實驗分為聯(lián)合訓練和空白對照兩組。取模型建立后小鼠和空白對照組小鼠，用異氟烷吸入麻醉，迅速將大腦分離，做冠狀切片（400μm），然后將腦片置于氧合的人工腦脊液(ASCF)中，25?C下孵育1-2小時后轉(zhuǎn)移至灌流槽，31?C下對腦片進行

3、灌流；采用IR-DIC光學顯微鏡(Nikon E600FN)熒光顯微鏡定位大腦嗅皮層谷氨酸能神經(jīng)元和GABA能神經(jīng)元；運用Axoclamp-200B放大器，電流鉗和電壓鉗模式全細胞記錄方法研究小鼠大腦嗅皮層谷氨酸能神經(jīng)元和 GABA能神經(jīng)元內(nèi)在特性（ARP；Vts；Vr；Input-Output；ISI）以及神經(jīng)元突觸傳遞效應(yīng)（sEPSC；sIPSC）的變化，數(shù)據(jù)輸入Clampex10.1進行處理分析。
　　結(jié)果：1.行為學結(jié)果：

4、（1）僅受嗅覺訓練的小鼠實驗中回避乙酸丁酯的概率高于空白對照組(P<0.05)。（2）受觸須觸覺訓練的小鼠實驗中回避乙酸丁酯的概率與空白對照組比較無明顯差異(P>0.05)。（3）小鼠在接受觸須-嗅覺聯(lián)合訓練10天后能建立起以乙酸丁酯氣味刺激為條件刺激的條件反射。在給予非條件刺激時，小鼠回避乙酸丁酯的概率明顯高于空白對照組(P<0.01)，且與嗅覺訓練組相比有顯著性差異。
　　2.膜片鉗實驗結(jié)果：（1）電流鉗模式實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與空

5、白對照組相比，受觸覺-嗅覺聯(lián)合訓練的小鼠其谷氨酸能神經(jīng)元群集發(fā)放動作電位的發(fā)放容量顯著增加，動作電位間距ISI縮短(P<0.05)，閾電位(Vts)降低(P<0.05)，絕對不應(yīng)期縮短（P<0.05）,
　　單位時間內(nèi)發(fā)放動作電位的個數(shù)（Input and Output）增加(P<0.05)。GABA能神經(jīng)元的群集發(fā)放動作電位的發(fā)放容量顯著降低，動作電位間距ISI延長(P<0.05)，閾電位(Vts)升高(P<0.05)，絕對不應(yīng)

6、期延長（P<0.05）,單位時間內(nèi)發(fā)放動作電位的個數(shù)（Input and Output）減少(P<0.05)（2）電壓鉗模式實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，受觸覺-嗅覺聯(lián)合訓練的小鼠與空白對照組相比，谷氨酸能神經(jīng)元的自發(fā)性興奮性突觸后電流sEPSCs的電流間距縮短（P<0.05），電流幅度增加(P<0.05)，自發(fā)性抑制性突觸后電流sIPSCs的電流間距延長（P<0.05），電流幅度減小(P<0.05)。GABA能神經(jīng)元的自發(fā)性興奮性突觸后電流 sEPS